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1、四種提取方法對沙棘總黃酮提取的影響 摘要:目的比較超聲波、閃式、微波和回流四種提取法對沙棘總黃酮提取的影響。方法采用超聲波、閃式、微波和回流四種提取法對沙棘籽中黃酮進行提??;采用紫外分光光度法,檢測波長為510nm,測定沙棘籽各提取液中的OD值,計算黃酮含量并進行比較。結(jié)果超聲波、閃式、微波和回流提取液中的總黃酮含量分別是9.8,14.16,8.8,10.39mg/g。結(jié)論實驗結(jié)果表明,閃式提取法對沙棘總黃酮的提取率最高,略優(yōu)于回流提取法,超聲提取法次之,微波提取法最低?! £P(guān)鍵詞:沙棘籽;黃酮;提取法;比較
2、沙棘總黃酮對心臟功能、呼吸系統(tǒng)疾病、消化系統(tǒng)疾病、燒傷、燙傷和癌癥等均有較好作用?! 榱顺浞痔崛『屠蒙臣S酮,本文以沙棘為研究對象,分別采用超聲波、閃式、微波和回流提取法提取沙棘籽中的黃酮,并將四種方法對黃酮的提取率作一比較,篩選出最好的提取方法,為沙棘黃酮的合理利用奠定良好理論基礎(chǔ)?! ?儀器、材料和試劑 JHBE-50S閃式提取控制器(北京金鼎科技發(fā)展有限公司);UV757CRT紫外可見分光光度計(上海精密科學(xué)儀器有限公司);FA2004電子分析天平(上海恒平科學(xué)儀器有限公司;超聲波清洗器(昆明超聲儀有限
3、公司)。5 蘆丁對照品(中國藥品生物制品鑒定所,純度大于98%);沙棘購買于佳木斯市寶泰醫(yī)藥公司,經(jīng)佳木斯大學(xué)藥學(xué)院宗希明教授鑒定為沙棘;所用試劑為分析純?! ?方法 2.1黃酮的含量測定 2.1.1對照品溶液的配制。精確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品19.98mg,加入30mL乙醇使其溶解,冷卻后定容至100mL,搖勻,即得0.1998mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液?! ?.1.2供試品溶液的配制。精確稱量沙棘干燥藥材10.00g,按不同方法提取后得提取液,加入適量乙醇溶解并定容至500mL,搖勻,即得?! ?.1.3紫外顯色方
4、法。取待測溶液于25mL的容量瓶中,加入10%的NaNO2溶液1.0mL,搖勻,室溫放置6min;加入10%的Al(NO3)3溶液1.0mL,搖勻,室溫放置6min;再加入5%的NaOH溶液10.0mL,搖勻,室溫放置15min;加入乙醇定容至25mL容量瓶中,搖勻即可?! ?.1.4最大吸收波長的確定。精密移取3.0mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液于25mL的容量瓶中,按2.1.3項下方法顯色,利用紫外可見分光光度計,在波長為450-600nm區(qū)間掃描,確定最大吸收波長為510nm?! ?.1.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。精密移取標(biāo)準(zhǔn)溶液
5、0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL分別置于25mL容量瓶中,加入乙醇12.0mL,11.0mL,10.0mL,9.0mL,8.0mL,7.0mL后,按2.1.3項下方法顯色,用紫外可見分光光度計在510nm波長下測定吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,通過計算得到回歸方程。 2.2沙棘籽中黃酮的提取5 2.2.1超聲波提取法。精密稱取10.02g沙棘籽粉末于錐形瓶中,加入60%乙醇,料液比1:15(g:mL),超聲提取時間30min,提取溫度70℃-80℃,超聲功率600W,提取2次,合并濾液
6、,定容于500mL容量瓶中,備用。 2.2.2閃式提取法。精密稱取10.11g沙棘籽粉末置于閃式提取器,加入80%乙醇,料液比1:40(g:mL),閃式提取40s,2次,將提取液定容于500mL容量瓶中,備用。 2.2.3微波提取法。精密稱取10.07g沙棘籽粉末置于微波爐專用杯中,加入75%乙醇浸泡10min,料液比為1:25(g:mL),微波功率為400W,提取10min,將提取液定容于500mL容量瓶中,備用?! ?.2.4回流提取法。精密稱取10.20g沙棘籽,置于圓底燒瓶中,加入70%乙醇,料液比為1
7、:40(g:mL),提取溫度為90℃,提取時間為100min,提取2次,合并二次提取液后,定容于500mL容量瓶中,備用?! ?結(jié)果 3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線及回歸方程 按照2.1.5項下方法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖1,通過計算得到回歸方程y=0.5271x-0.0125,相關(guān)系數(shù)R2=0.9913。參照該曲線計算供試液中黃酮的含量?! ?.2各提取液中黃酮含量比較 采用4種不同方法對沙棘總黃酮進行提取,所得提取液經(jīng)過紫外分光光度法檢測并依據(jù)回歸方程計算得到各提取液總黃酮含量。測定結(jié)果見表1。四種提取方法閃式提取法提取率最高,其
8、次是回流提取法,再次為超聲提取,最次為微博提取法。5 4討論 本實驗分別考察了超聲、閃式、微波和回流提取法對沙棘總黃酮的提取影響,總黃酮含量分別是9.8mg/g,14.16mg/g,8.8mg/g和10.39mg/g。實驗結(jié)果表明,閃式提取法略優(yōu)于回流提取法,超聲提取法次之,微波提取法最低。閃式提取法為黃酮的提取提供了一種高效、簡便易操作的新方法,吸收了