枇杷花藥培養(yǎng)愈傷組織誘導研究

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1、枇杷花藥培養(yǎng)愈傷組織誘導研究　　摘要以枇耙花藥為試驗材料，采用完全組合設(shè)計研究了溫度、蔗糖濃度、激素對花藥愈飭組織誘導的影響。結(jié)果表明：預處理對花藥愈傷組織誘導起決定作用，其中低溫預處理對于花藥愈傷組織誘導效果最為顯著；MS培養(yǎng)基中加入0.5%～1.0%的2，4-D，5%～7%的蔗糖對枇杷花藥誘導率最高?！　￡P(guān)鍵詞批杷；花藥培養(yǎng)；愈訪組織；誘導率　　中圖分類號S667文獻標識碼A文章編號1007-5739（2016）10-0064-01　　枇杷（Eriobotryajaponica）為薔薇科枇杷

2、屬，為亞熱帶常綠果樹，果實肉質(zhì)細軟多汁，風味獨特，營養(yǎng)豐富，深受消費者喜愛，具有極高的營養(yǎng)價值、經(jīng)濟價值和藥用價值，是我國南方特有的珍稀水果。但大多數(shù)枇杷品種種子大而多，一般可食率僅67%～74%，可食部分相對較少，影響了枇杷的食用價值與商品價值。選育少核、小核和無核枇杷品種成為枇杷育種工作的重要目標，而研究枇杷花藥愈傷組織誘導，能為誘導單倍體植株奠定技術(shù)基礎(chǔ)[1-2]。　　1材料與方法　　1.1試驗材料　　試驗材料為宜賓職業(yè)技術(shù)學院農(nóng)業(yè)科技園大五星、早鐘6號及龍泉1號枇杷栽培品種的花藥。從幼樹

3、及壯年枇杷植株上取不同直徑為0.3～0.84mm枇杷花蕾，在自來水中沖洗20min，采用低溫、熱激、高滲透壓與高速離心的方法，對花蕾進行預處理?！　?.2去絨滅菌　　用手術(shù)刀片將經(jīng)過預處理的枇杷花蕾表面絨毛刮去，用70%酒精浸泡30s，后用0.5%HgCl2水溶液表面消毒8min，再用無菌水沖洗4～5次，在無菌條件下?lián)荛_花蕾取出花藥，同時徹底去除花絲?！　?.3預處理　　低溫4℃分別處理24、48、96、144h，培養(yǎng)基中附加2.0mg/L6-BA和0.5mg/L2，4-D，添加7%蔗糖和0.6

4、%瓊脂。　　1.4培養(yǎng)基　　采用MS大量元素、微量元素和有機物。培養(yǎng)基附加2.0mg/L6-BA和0.5mg/L2，4-D，并附加不同濃度的蔗糖（0、3%、5%、7%、9%）、葡萄糖（0、3%、7%、9%），0.6%瓊脂。不同植物激素水平和濃度（2，4-D：0.01、0.02、0.05、0.10、0.30、0.50mg/L）進行完全組合，添加7%蔗糖和0.6%瓊脂?！　?.5試驗過程　　每個三角瓶接種20枚枇杷花藥，用無菌封口膜密封，在25℃下黑暗條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)1周后，將未污染的花藥轉(zhuǎn)入新鮮遇

5、上組織誘導培養(yǎng)基上，每個三角瓶轉(zhuǎn)入20枚枇杷花藥。培養(yǎng)4周以后統(tǒng)計培養(yǎng)效果?！　?結(jié)果與分析　　2.1滅菌方式對愈傷組織形成的影響4　　將花藥剝出以后，對花藥進行滅菌處理受到的傷害較為嚴重，在接種后會快速褐變。對整個花蕾進行滅菌，使花藥受到的滅菌劑的傷害降低。采用流水下沖洗花蕾1～2h處理花蕾，然后用75%酒精處理30s，0.1%升汞滅菌25～30min，無菌水沖洗5～6次后，剝出花藥，接種污染率高達90%。將枇杷花蕾表面絨毛刮去，然后再進行處理，會使污染率明顯下降5%左右?！　?.2預處理對花

6、藥愈傷組織誘導的影響　　沒有經(jīng)過預處理的枇杷花藥在培養(yǎng)，對培養(yǎng)的反應差，誘導啟動率誘導率低，基本產(chǎn)生不了愈傷組織。經(jīng)過預處理后，誘導率明顯提高。其中低溫預處理對花藥愈傷組織誘導效果最顯著，對大五星枇杷誘導率達53%，龍泉1號達56.33%，早鐘6號74%。低溫預處理從24h增加到48h，能顯著提高誘導率，但再延長，愈傷組織誘導率則會逐步下降。　　2.3糖源種類和濃度對花藥愈傷組織誘導的影響　　蔗糖濃度從0增加到5%時，愈傷組織的誘導率也隨之增加，其中早鐘6號枇杷的花藥愈傷組織誘導率最高。蔗糖濃度

7、從7%到9%時，愈傷組織誘導率出現(xiàn)下降趨勢?！　?.4激素種類、濃度和組合對花藥愈傷組織誘導的影響　　在MS培養(yǎng)基上，或者在MS培養(yǎng)基中添加IBA、NAA、IAA、6-BA的不同濃度和組合，均不能誘導出愈傷組織。但添加了2，4-D后，能誘導枇杷花藥分化形成愈傷組織。并且2，4-D濃度從0.01mg/L增加到0.50mg/L時，誘導率也從2.33%增加到69.33%。但在0.5～1.0之間，處于不變狀態(tài)。　　3結(jié)論與討論4　　植物花藥愈傷組織形成受多種因素的制約。該試驗中，枇杷花蕾表面的絨毛給消毒

8、造成了較大的困難，刮去絨毛后消毒滅菌能有效防止污染的發(fā)生。同時，預處理對花藥愈傷組織誘導起決定作用，沒有經(jīng)過預處理的枇杷花藥幾乎不能誘導脫分化及再分化?；ɡ俳?jīng)過預處理后，誘導率顯著提高，在所有預處理方法中，低溫預處理效果最為顯著[3-4]。　　糖類種類和濃度對花藥愈傷組織的誘導率、愈傷組織發(fā)生時間、質(zhì)地、組織學起源有顯著影響。激素種類和糖類濃度均顯著地影響到了愈傷組織的誘導率，2，4-D在枇杷花藥培養(yǎng)中起著關(guān)鍵作用。但是，預處理對促進花藥愈傷組織誘導的機制，以及愈傷組織再分化條件，需要進一步完善