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1、藏紅花愈傷組織誘導(dǎo) 及固液兩步法合成藏紅花素唐蕓蕓生物技術(shù)2007.6.13一、論文的選題背景二、論文的研究方法三、論文后的收獲四、創(chuàng)新和不足之處論文選題背景藏紅花的生長發(fā)育期長。藏紅花生長的環(huán)境條件要求苛刻。藏紅花只開花不結(jié)果，繁殖困難。藏紅花產(chǎn)量低。藏紅花的生物學(xué)特性主要鑒于論文選題背景藏紅花資源現(xiàn)狀藏紅花資源緊缺，在我國,藏紅花只有少量分布,主要集中在西藏、浙江、江蘇、上海等地，其于地方屬于藏紅花限制性氣候因素。藏紅花研究現(xiàn)狀研究學(xué)者對藏紅花的組織培養(yǎng)和利用藏紅花愈傷組織生產(chǎn)次生物質(zhì)研究較少。論文的研究方法試驗材料及方法步驟球莖提前
2、出芽的結(jié)果MS培養(yǎng)基對不同外植體愈傷組織誘導(dǎo)率的影響不同培養(yǎng)基的對同種外植體愈傷組織誘導(dǎo)率的影響不同的激素配比對同種外植體愈傷組織誘導(dǎo)率的影響。淺述了固液兩步法合成藏紅花素方面的問題材料與方法試驗材料：外植體:葉片包括幼葉(初冬剛出苗時葉片)和老葉(初春葉片)；芽包括幼芽(球莖上的芽)和嫩芽(球莖幼芽生長約lcm左右時的芽)；球莖。材料與方法試驗方法：消毒滅菌：將不同的外植體于自來水中沖洗干凈，放入75%酒精中搖動30s，再以0.1%HgC12溶液中消毒8min，無菌水沖洗四次，徹底洗去殘余HgC12，濾紙吸干。接種：在超凈工作臺上將消毒
3、后的外植體切片(塊)：葉片分葉尖、葉中部和葉基部，切約0.5cm2左右；芽分為幼芽和嫩芽，分別切成小片；球莖切成小塊，分別接種。材料與方法試驗方法：培養(yǎng)條件:誘導(dǎo)培養(yǎng)基的種類為MS,B5,White，激素濃度范圍2，4-D0.1-5mg/L，BAP0.1-3.0mg/L。球莖提前出芽方法:將5～6月處于休眠時期的藏紅花球莖,放置于人工氣候箱中,光照強度2560lx；每天光照時間為10h；溫度(20±0.3)℃；濕度為80%。每天黑暗時間為14h；溫度(18±0.3)℃；濕度為80%。在此條件下培養(yǎng)1個月。結(jié)果與分析球莖提前出芽的結(jié)果:藏紅
4、花球莖的生長條件需要適宜的溫度、濕度、光照強度。采用人工氣候箱培養(yǎng),上述各種指標(biāo)均可人工進行調(diào)節(jié)，而且比較穩(wěn)定，可以加濕并能夠自動調(diào)節(jié)濕度,滿足藏紅花的生長需要的各種環(huán)境。試驗結(jié)果表明在人工氣候箱中培養(yǎng)藏紅花比在一般培養(yǎng)箱中提前1個月發(fā)芽。結(jié)果與分析MS培養(yǎng)基對不同外植體愈傷組織誘導(dǎo)率的影響:由表1可見,葉片、芽和球莖均可誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織，誘導(dǎo)率最高達99%。不同生長時期葉片的誘導(dǎo)率差異明顯，初冬剛出幼葉，誘導(dǎo)率較高，葉片老化后，誘導(dǎo)率明顯下降，同一葉片的不同的部位(近葉尖、葉中部和葉基部)，誘導(dǎo)率差異不明顯。幼芽、嫩芽的誘導(dǎo)率均高達97
5、%，球莖的誘導(dǎo)率77.1%。結(jié)果與分析不同培養(yǎng)基種類對愈傷組織誘導(dǎo)率的影響:由表2可見，三種不同培養(yǎng)基添加一定的激素均可誘導(dǎo)幼葉產(chǎn)生愈傷組織，并且誘導(dǎo)率高達98%以上。培養(yǎng)基對藏紅花愈傷組織的誘導(dǎo)率和愈傷組織的形態(tài)都有一定的影響。MS培養(yǎng)基中，愈傷組織出現(xiàn)的時間最早,誘導(dǎo)率最高,誘導(dǎo)的愈傷組織為大的塊狀,黃色或白色,生長快,又不容易褐化。White和B5培養(yǎng)基具有誘導(dǎo)率較低、部分容易褐化等缺點。結(jié)果與分析不同激素配比對愈傷組織誘導(dǎo)率的影響：由表3可見，不同的激素配比均可誘導(dǎo)幼葉產(chǎn)生愈傷組織，并且誘導(dǎo)率均在80%以上，其中當(dāng)2,4-D2.0
6、mg/L,BAP0.1-0.5mg/L時，誘導(dǎo)率均在95%以上，可以大量形成幼葉愈傷組織，激素配比以2,4-D2.0mg/L,BAP0.1-0.5mg/L為宜。結(jié)果與分析表1MS培養(yǎng)基對不同外植體愈傷組織誘導(dǎo)率的影響外植體接種快數(shù)出愈快數(shù)誘導(dǎo)率%葉片芽幼葉（初冬）老葉（初春）幼芽嫩芽球莖86010002403001500852308234292115699.131.097.597.377.1結(jié)果與分析表2不同培養(yǎng)基種類對愈傷組織誘導(dǎo)率的影響培養(yǎng)基接種塊數(shù)出愈塊數(shù)誘導(dǎo)率%愈傷組織的形態(tài)MS50049699.2塊狀;黃色或白色;生長最快,部分
7、容易褐化White50049198.2塊狀;黃色或白色;生長較快,部分容易褐化B550049298.4顆?；驂K狀;黃色或白色;生長較快,容易褐化結(jié)果與分析表3不同培養(yǎng)基種類對愈傷組織誘導(dǎo)率的影響B(tài)AP（mg/L）2,4-D(mg/L)0.10.51.02.03.00.183.985.080.282.983.50.592.892.083.090.182.31.097.297.192.791.791.52.099.598.195.995.896.23.095.793.092.893.293.84.091.792.191.593.592.65.
8、087.690.688.589.392.6討論實驗解決的問題：本文在藏紅花的愈傷組織誘導(dǎo)方面，以葉片、芽、球莖作為不同外植體，分別獲得了較高的誘導(dǎo)率。實現(xiàn)了不同外植體的定向培養(yǎng)，即在一定的條件
