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《絞股藍(lán)皂苷發(fā)酵產(chǎn)物對小鼠免疫功能的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、絞股藍(lán)皂苷發(fā)酵產(chǎn)物對小鼠免疫功能的影響 摘要：采用HPLC對發(fā)酵前后的絞股藍(lán)皂苷（Gvpenoside）進行了分析，選用75只健康小鼠，隨機分為陽性對照組、陰性對照組、低劑量試驗組、中劑量試驗組、高劑量試驗組共5個處理組，每組5只小鼠，3個重復(fù)。陰性對照組每日灌服0.5mL生理鹽水，陽性對照組每日灌服0.5mL未發(fā)酵的絞股藍(lán)皂苷溶液，3個試驗組分別每日灌服發(fā)酵的絞股藍(lán)皂苷溶液0.2、0.5、0.8mL，連續(xù)灌服10d。結(jié)果表明，HPLC分析顯示，經(jīng)枯草芽孢桿菌發(fā)酵后的絞股藍(lán)皂苷成分發(fā)生了明顯變化，且與對照組相比，經(jīng)過發(fā)酵的絞股藍(lán)皂苷能夠顯著提高小鼠的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)（P<
2、0.05），同時還能顯著提高小鼠血清中IgG和IgA的含量（P<0.05），對小鼠血清中IL-2的產(chǎn)生也有一定的促進作用。說明枯草芽孢桿菌對絞股藍(lán)皂苷具有一定的生物轉(zhuǎn)化作用，且經(jīng)微生物轉(zhuǎn)化后的絞股藍(lán)皂苷具有促進小鼠免疫器官發(fā)育和增強體液免疫的功效。 關(guān)鍵詞：絞股藍(lán)皂苷；枯草芽孢桿菌；發(fā)酵；小鼠；免疫功能 中圖分類號：R285.5；R593文獻標(biāo)識碼：A文章編號：0439-8114（2016）09-2304-047 絞股藍(lán)[Gynostemmapentaphyllum（Thunb.）Makion]為葫蘆科（Cucurbitaceae）絞股藍(lán)屬（Gyuos-temma）植物
3、，在動物醫(yī)學(xué)上具有抗腫瘤、增強免疫、鎮(zhèn)靜止痛等作用。藥理學(xué)研究表明，絞股藍(lán)含有多種化學(xué)成分，其中以絞股藍(lán)皂苷為主要的藥理活性物質(zhì)。近年來。隨著中藥制劑研究的不斷深入。國內(nèi)開展了利用微生物發(fā)酵技術(shù)對中草藥有效成分進行生物轉(zhuǎn)化作用的研究，但是目前國內(nèi)關(guān)于絞股藍(lán)皂苷微生物轉(zhuǎn)化作用的研究尚不多見，如陳良華等的研究表明，黑曲霉可對絞股藍(lán)皂苷進行生物轉(zhuǎn)化。且轉(zhuǎn)化后的成分具有抗癌活性：樸香蘭等的研究證明，經(jīng)保加利亞乳桿菌發(fā)酵轉(zhuǎn)化后的絞股藍(lán)皂苷較轉(zhuǎn)化前具有更強的抗癌活性。但是，上述研究均未表明絞股藍(lán)皂苷經(jīng)微生物轉(zhuǎn)化后，其轉(zhuǎn)化成分是否還具有諸如增強免疫器官指數(shù)和體液免疫水平等其他的生物學(xué)特性。
4、因此，本研究將以絞股藍(lán)皂苷為底物，利用微生物對其進行發(fā)酵，并檢測發(fā)酵后的絞股藍(lán)皂苷對小鼠的各項免疫功能具有何種作用，從而為微生物發(fā)酵絞股藍(lán)在畜牧業(yè)上的應(yīng)用提供參考依據(jù)。 1材料與方法 1.1試驗材料 絞股藍(lán)原藥購自河南順康醫(yī)藥有限責(zé)任公司：發(fā)酵用菌種為河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院微生物實驗室保存的枯草芽孢桿菌， 1.2試驗方法 1.2.1絞股藍(lán)皂苷的提取與發(fā)酵用粉碎機將適量的絞股藍(lán)粉碎，以25倍量（m/v）的75%乙醇溶液80℃提取2h，將提取液過濾并減壓濃縮成浸膏狀，將浸膏用適量蒸餾水懸浮，在梨形分液漏斗中用正丁醇萃取3次，萃取液減壓濃縮后再經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后得到干燥的絞股藍(lán)皂苷發(fā)
5、酵底物。將絞股藍(lán)皂苷發(fā)酵底物按3%比例加入液體轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基（葡萄糖1.0g，KH2PO41.0g，蛋白胨5.0g，MgSO4?7H2O0.5g，蒸餾水1000mL），經(jīng)高壓蒸汽滅菌后備用。將枯草芽孢桿菌按5%接種到上述培養(yǎng)基，于37℃7靜置培養(yǎng)4d。 1.2.2絞股藍(lán)皂苷發(fā)酵產(chǎn)物的HPLC檢測發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵液10000r/min離心5min，取上清液用等體積的飽和正丁醇萃取3次，所得有機溶劑在45℃減壓濃縮得殘留物，將殘留物中加入2mL甲醇，用0.45μm微孔濾膜過濾，備用。分別將絞股藍(lán)皂苷發(fā)酵后的提取物與未發(fā)酵的絞股藍(lán)皂苷進行HPLC分析。HPLC的分析條件為，色譜柱：
6、PhenomexC18柱（250min×4.6min×5μm）；柱溫30℃；檢測波長203nm；進樣量20μL；流速1.0mL/min；流動相為水（A）/乙腈（B）梯度洗脫：洗脫程序如表1所示?！ ?.2.3絞股藍(lán)皂苷發(fā)酵產(chǎn)物對小鼠免疫器官指數(shù)的影響75只體重20g左右的健康小鼠，平均隨機分為5組，每組5只小鼠，3個重復(fù)。分別為陰性對照組、陽性對照組、低劑量試驗組、中劑量試驗組、高劑量試驗組，其中陰性對照組每只小鼠每日灌服0.5mL生理鹽水，陽性對照組每只小鼠每日灌服未經(jīng)發(fā)酵的絞股藍(lán)皂苷溶液f絞股藍(lán)皂苷：水：1：1，V：V）0.5mL。低劑量、中劑量和高劑量試驗組每只小鼠每日
7、灌服經(jīng)過發(fā)酵的絞股藍(lán)皂苷溶液0.2、0.5、0.8mL，各組小鼠連續(xù)灌服10d，常規(guī)飼養(yǎng)管理。試驗期結(jié)束后24h，將各組小鼠摘眼球采血處死。利用精密電子天平稱量體重后，分別摘取脾臟和胸腺并稱重，計算脾臟指數(shù)（脾臟重/體重）和胸腺指數(shù)（胸腺重/體重）?！ ?.2.4絞股藍(lán)皂苷發(fā)酵產(chǎn)物對小鼠體液免疫因子的影響上述各組小鼠摘眼球采血后，將血液離心獲得血清，分別測定各組小鼠血清中的IgG、IgA、IL-2含量，具體方法按照各相應(yīng)的ELISA檢測試劑盒說明書進行。7 1.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)
