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1、甘蔗莖尖脫毒組織培養(yǎng)技術(shù)研究 摘要主要采取不同的熱處理、接種、莖尖解剖等階段設(shè)計對提高甘蔗的莖尖膜毒組織培養(yǎng)的成功率進(jìn)行研究，結(jié)果表明，對不同的甘蔗品種進(jìn)行熱處理時水浴溫度和時間不同；在甘蔗的莖尖解剖前，先用75%的酒精做莖尖消毒，能夠在很大程度上減少莖尖培養(yǎng)過程中出現(xiàn)的各種污染問題；接種時，將莖尖放置在濃度為150mg/L的PVP溶液或者無菌水中浸泡15min可減少酚污染，且150mg/L的PVP對甘蔗接種具有促進(jìn)作用。其中對于活性炭的使用要更加慎重，需要進(jìn)一步研究。 關(guān)鍵詞甘蔗；莖尖；脫毒
2、；組織培養(yǎng)技術(shù) 中圖分類號S566.1；Q813.1文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號1007-5739（2016）01-0101-026 甘蔗與其他的很多農(nóng)作物相似，是一種無性繁殖的作物，它主要是利用自身的莖尖來實現(xiàn)自我繁殖，但是經(jīng)過連續(xù)的種植以后很容易出現(xiàn)枝干感染以及體內(nèi)的病毒積累。有研究表明所有健康的甘蔗品種在種植5年以后必然會感染宿根矮化病。即使是十分優(yōu)良的甘蔗品種經(jīng)過多年種植以后，也會受到外界病毒的感染，這在很大程度上影響其優(yōu)良品種的特性，最終影響整個甘蔗生產(chǎn)的實際產(chǎn)量。在很長一段時間甘蔗的莖尖脫
3、毒培養(yǎng)技術(shù)一直是困擾著生物科研人員的問題，在過去的研究中，一般都采取熱處理同時結(jié)合莖尖分生組織培養(yǎng)的方法進(jìn)行甘蔗的脫毒，但是由于時間較長，在培養(yǎng)中容易出現(xiàn)污染以及褐變等問題會降低培養(yǎng)的成功率?；谶@種情況筆者采取新的甘蔗莖尖脫毒培養(yǎng)技術(shù)來提高甘蔗的生產(chǎn)率[1-2]?！ ?材料與方法 1.1試驗材料 選擇生長期為6～8個月的果蔗拔地拉和糖蔗（ROC22），以上品種在桂西北地區(qū)均有種植?！ ?.2試驗方法 1.2.1熱水處理。分別在果蔗拔地拉和糖蔗（ROC22）的甘蔗地里隨機(jī)選取40個形狀大小相
4、同的單芽莖斷，每個莖斷切成三等分，每種樣品分3組，每組40個。將這3組分別采取不同的處理方法，其中2組分別放在50、52℃中浸泡相同的時間（30min），而另外一組不做任何處理（CK）。然后取出充分晾干，進(jìn)行培養(yǎng)（采用新沙），培養(yǎng)溫度保持在38～40℃，然后每天進(jìn)行適當(dāng)澆水[3-4]。經(jīng)過7d后詳細(xì)統(tǒng)計生長和出牙情況。 1.2.2接種前處理。在沙床上選擇長度為10～15cm的甘蔗幼苗，用清水將幼苗上的泥沙清除干凈，同時避免損傷到幼苗，晾干后再等分成3組，為了更好地研究，需要每組15株，然后放到超
5、凈工作臺上進(jìn)行處理，第1組采用75%酒精處理，第2組利用無菌水處理，第3組不采取任何的處理。對每組分別進(jìn)行莖尖皮剝離，剝離到外皮的最后一層，然后切片，長度在1～2mm之間，最后全部放到已經(jīng)滅菌的培養(yǎng)皿中。等到7d后記錄甘蔗幼苗污染率和生長情況?！ ?.2.3減少酚污染的處理。在第1組操作基礎(chǔ)上對莖尖采取4個不同的處理方法。第1種是直接放到無菌水中浸泡；第2種是放到濃度為150mg/L的PVP溶液中持續(xù)浸泡156min，然后將這2種方法處理后的莖尖放到普通的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)；第3種是將沒有經(jīng)過任何浸
6、泡莖的尖接種到含有碳粉的培養(yǎng)基中；第4組作為對照組不進(jìn)行任何處理直接放在普通培養(yǎng)基中培養(yǎng)。觀察這4組莖尖的生長情況記錄污染、褐變情況。 1.2.4培養(yǎng)基的配置。普通培養(yǎng)基配置MS+0.5mg/L6-BA+0.01mg/LNAA+30g/L蔗糖，以上作為基本培養(yǎng)基，其他需要作對照的組加上對應(yīng)物質(zhì)即可，對以上培養(yǎng)基每瓶加上4層的濾紙，每瓶按8～10mL加入適當(dāng)?shù)囊后w培養(yǎng)基，要保證濾紙不被浸沒?！ ?.2.5培養(yǎng)方式。培養(yǎng)容器選用透明玻璃瓶，容積以200mL為宜，所有處理都要放在光照強(qiáng)度為1200～1
7、500lx、溫度在25～30℃、相對濕度達(dá)到56%～80%的培養(yǎng)室中進(jìn)行10～12h的培養(yǎng)[5-6]。 2結(jié)果與分析 2.1不同溫度熱水處理對甘蔗出芽率的影響 從表1可以看出，ROC22在50℃和52℃時，其出芽率均為77.5%，但是不做任何處理時其出芽率可以達(dá)到100.0%，這說明了進(jìn)行水浴會影響到其出芽率，但影響的程度不大。但是果蔗的出芽率受到的影響比較大，在50℃的水浴中出芽率是50.0%，升高2℃后出芽率降為25.0%，不進(jìn)行任何處理的出芽率為90.0%。其主要原因是，果蔗的莖尖組織
8、與ROC22相比更嫩，受到的溫度影響更大。進(jìn)行水浴時莖尖的組織會被燙死，導(dǎo)致出芽率下降?！ ?.2不同前處理對甘蔗莖尖培養(yǎng)污染率的影響6 通過表2觀察發(fā)現(xiàn)，以上2個品種沒有經(jīng)過前期處理的莖尖其污染率都達(dá)到了50%，而采用酒精或者是無菌水處理后的莖尖其污染率都有明顯的下降。經(jīng)過處理后的2種對比發(fā)現(xiàn)經(jīng)過酒精處理后的污染率明顯較低，這說明酒精處理后的莖尖具有消毒作用。作為莖尖解剖中其操作過程是非常細(xì)致的，操作人員需要一層層解剖，在解剖中越徹底酒精達(dá)到的部位就越廣，同時，如果不進(jìn)行消毒處
