植物的莖尖培養(yǎng)脫毒技術(shù).ppt

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1、植物的莖尖培養(yǎng)脫毒技術(shù)植物莖尖脫毒技術(shù)利用植物莖尖組織培養(yǎng)，結(jié)合血清病毒檢測技術(shù)，在防蚜傳毒條件下，將影響植物正常生長的植物病毒脫除的高新農(nóng)業(yè)生物技術(shù)。莖尖脫毒主要包括表面滅菌、莖尖剝離、莖尖培養(yǎng)等步驟。原理及依據(jù)病毒在植物體內(nèi)分布不均，莖尖處含量最少在一個植物體內(nèi)，病毒易于通過維管系統(tǒng)而移動，但在分生組織中不存在維管系統(tǒng)。病毒在細(xì)胞間移動只能通過胞間連絲，速度很慢，難以趕上活躍生長的莖尖；在旺盛分裂的分生細(xì)胞中，代謝活性高，競爭抑制了病毒的復(fù)制；在莖尖存在高水平內(nèi)源生長素，也可能抑制病毒的增殖。主要方法步驟（1）莖尖的剝

2、離：此步是技術(shù)關(guān)鍵，一般在解剖鏡下操作。2-3cm的莖段，剝?nèi)ゴ笕~，水沖洗1h左右，酒精快速消毒，無菌條件下5%漂白粉溶液（或其他消毒劑）消毒7-10min，無菌水清洗，解剖鏡下剝?nèi)∏o尖。（2）切取莖尖的大小雖然切取莖尖越小，帶有病毒的可能性就越小，但組織培養(yǎng)中，切取的莖尖太小，則不易成活。不同種類的植物和不同病毒，切取的最適莖尖大小也不同。（3）組織培養(yǎng)常用基本培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基，它有較高濃度的無機(jī)鹽，對促進(jìn)組織分化和愈傷組織生長有利；植物生長調(diào)節(jié)的種類和配比依培養(yǎng)種類和生長時期來調(diào)整。酒精擦拭手外植體消毒浸泡5-7mi

3、n器械消毒酒精燈灼燒酒精擦拭培養(yǎng)皿酒精擦拭旋轉(zhuǎn)灼燒顯微鏡下獲取莖尖接種蓋好瓶塞幾種方法的配合使用是提高植物脫毒效果：(1)高溫?zé)崽幚砼c微莖尖脫毒培養(yǎng)技術(shù)(2)高溫?zé)崽幚砼c微（體）莖尖嫁接培養(yǎng)技術(shù)(3)化學(xué)處理與莖尖脫毒培養(yǎng)技術(shù)香石竹脫毒的具體操作過和如下：（1）熱處理將盆栽植株或離體瓶苗，在36～38℃下處理2周，或每天在36℃16小時和38℃8小時處理共30天，光照為3000lx。（2）表面消毒選取盆栽香石竹植株葉腋間生出的側(cè)芽為外植體，先用自來水沖洗半小時，用75%的酒精消毒30秒，再用2.5%次氯酸鈣或次氯酸鈉溶液處

4、理15分鐘,取出后用無菌蒸餾水清洗4次,用無菌濾紙吸去多余水分備用。（3）莖尖剝離在雙筒解剖鏡下。切除葉片使芽體暴露，用解剖針剝掉幼葉，直到只剩下2個最幼小的葉原基。（4）莖尖培養(yǎng)用小刀片切下莖尖放入培養(yǎng)基。培養(yǎng)條件為25℃，光照16小時，光照強(qiáng)度為2000lx，平均兩周進(jìn)行一次轉(zhuǎn)接，5～7周可獲得單個小植株。（1）熱處理將盆栽植株或離體瓶苗，在36～38℃下處理2周，或每天在36℃16小時和38℃8小時處理共30天，光照為3000lx。植物的莖尖培養(yǎng)脫毒技術(shù)優(yōu)缺點：莖尖生長點的培養(yǎng)成了去除植物病毒，使植物復(fù)壯的重要方法。

5、莖尖培養(yǎng)還可以去除其他病原體，如細(xì)菌、真菌等。莖尖越小，去病毒機(jī)會越大，脫毒效果就越好，但同時因為其含營養(yǎng)及水量太低，故培養(yǎng)時對培養(yǎng)基的要求就越高，對剝離技術(shù)要求也越高。植物的莖尖培養(yǎng)脫毒技術(shù)應(yīng)用莖尖脫毒培養(yǎng)對植物病毒的脫除效果好，后代遺傳性穩(wěn)定，是目前生產(chǎn)上最常用的脫毒措施，已在馬鈴薯、花卉、水果、蔬菜等作物脫毒快繁上得到了廣泛應(yīng)用。