《GBT186 43-2002-雞馬立克氏病診斷技術(shù)》.pdf

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1、cB/T18643-2002前言馬立克氏病(Marek'sdisease簡稱MD)是雞的一種由馬立克氏病疙疹病毒(簡稱MDV)引起的傳染性腫瘤性疾病。其病理組織學(xué)特征為外周神經(jīng)、性腺、虹膜、各種內(nèi)臟器官、肌肉和皮膚的單個或多個組織器官發(fā)生腫瘤性淋巴細(xì)胞浸潤。病雞表現(xiàn)為消瘦、肢體麻痹，并常有急性死亡。MD傳染性強(qiáng)，死亡率高，是雞的主要傳染病之一。我國70年代末研究和建立了MD瓊脂擴(kuò)散特異性血清學(xué)診斷方法，先后研制和改進(jìn)了用于MD血清學(xué)診斷用的MD皮膚抗原和MDV細(xì)胞培養(yǎng)抗原。這兩種抗原用于MD的檢測與國外同類進(jìn)口抗原相比，具有同樣的敏感性。然

2、而由于MD疫苗的使用，僅能預(yù)防MD腫瘤的發(fā)生，不能阻止環(huán)境中MD野外毒株的感染及在體內(nèi)的復(fù)制;同時MD血清「型疫苗的應(yīng)用，也可以刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，并可以檢測到病毒抗原的存在。因此，盡管MD瓊脂擴(kuò)散試驗具有良好的特異性，MD瓊脂擴(kuò)散試驗的檢測結(jié)果，對于MD的臨床診斷僅具有參考價值。MDV廣泛存在于自然界中。除SPF雞群外，幾乎所有的雞場都不同程度的存在著MDV野外毒株的流行。MDV野外毒株致病力強(qiáng)弱存在著差異，因此病雞臨床主要表現(xiàn)為神經(jīng)型(古典型)和內(nèi)臟型(急性型);此外，比較少見的還有皮膚型和眼型，有時可以混合發(fā)生。大多數(shù)死于MD的雞

3、剖檢時，在各內(nèi)臟器官中可以見到單發(fā)性或多發(fā)性腫瘤，最常見的腫瘤發(fā)生部位有肝臟、腎臟、性腺等內(nèi)臟器官。值得注意的是，其他一些禽病也可以導(dǎo)致內(nèi)臟腫瘤的發(fā)生，如禽白血病(QA)和網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病(RE)。其腫瘤的外觀形態(tài)與MDV引起的腫瘤在臨床剖檢時無法區(qū)別，應(yīng)通過病理組織學(xué)變化進(jìn)行判定。另外，MD的臨床診斷還可以通過MD特征性的臨床癥狀和病理變化作為診斷依據(jù)。如病雞臨床癥狀表現(xiàn)為兩腿前后伸展，呈“劈叉”姿勢;尸體剖檢時可見到坐骨神經(jīng)單側(cè)或雙側(cè)腫大、橫紋消失、皮膚發(fā)生腫瘤、虹膜褪色和瞳孔不規(guī)則。這些變化在其他傳染病很難見到，可以作為MD的臨床診斷指

4、征?？傊?，由于MD發(fā)病機(jī)理及致病過程比較復(fù)雜，其血清學(xué)診斷方法應(yīng)用范圍有一定的局限性，對于臨床診斷僅具有參考價值。而MD的特征性的臨床癥狀及剖檢病理變化在發(fā)病雞群中并不常見，MD的臨床診斷一般需要病理組織學(xué)檢查進(jìn)行確診。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B都是標(biāo)準(zhǔn)的附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提示。本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:趙曉巖、吳東來。中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)Gs/'r18643-2002雞馬立克氏病診斷技術(shù)DiagnotictechniquesforMarek's

5、disease1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了雞馬立克氏病(MD)的診斷技術(shù)。木標(biāo)準(zhǔn)適用于MD的流行學(xué)病普查、產(chǎn)地和口岸檢疫、SPF雞群的疫病監(jiān)測2MD瓊脂擴(kuò)散試驗檢測技術(shù)雞馬立克氏病瓊脂擴(kuò)散試驗既可以用于馬立克氏病病毒抗原的檢出，也可以用于馬立克氏病病毒抗體的檢出該方法一般在馬立克氏病病毒感染14d-24d后檢出病毒抗原;抗體的檢出一般在病毒感染3周后2.1材料準(zhǔn)備2.1門抗原和標(biāo)準(zhǔn)陽性血清。2門.2溶液配制:a)pH7.40.01mol/1-磷酸鹽緩沖液;b)1%硫柳汞溶液;c)生理鹽水。以上各種溶液配制方法見附錄A(標(biāo)準(zhǔn)的附錄)。2門3瓊脂板的制備

6、:見附錄s(標(biāo)準(zhǔn)的附錄)。2.2操作方法2.2.1馬立克氏病病毒抗原檢測2.2.1.1打孔2.2門門.1在已制備的瓊脂板(見附錄s)上，用直徑4mm或3mm直徑的打孔器按六角形圖案打孔，或用梅花形打孔器打孔。中心孔與外周孔距離為3mm,2.2.1.1.2將孔中的瓊脂用8號針頭斜面向上從右側(cè)邊緣插人，輕輕向左側(cè)方向挑出，勿損壞孔的邊緣，避免瓊脂層脫離平皿底部。2.2.1.2封底用酒精燈火焰輕烤平皿底部至瓊脂輕微溶化為止，封閉孔的底部，以防樣品溶液側(cè)漏2.2門.3加樣用微量移液器吸取用滅菌生理鹽水稀釋的標(biāo)準(zhǔn)陽性血清(按產(chǎn)品使用說明書的要求稀釋)

7、滴人中央孔，標(biāo)準(zhǔn)陽性抗原懸液分別加人外周的第1、第4孔中，在外周的第2,3,5,6孔處(不打孔)按順序分別插人被檢雞的羽毛髓質(zhì)端(長度約。.5cm);或在第2,3,5,6孔中加人被檢的羽髓浸出液，每孔均以加滿不溢出為度，每加一個樣品應(yīng)換一個吸頭。2.2.1.4感作加樣完畢后，靜止5min-10min，將平皿輕輕倒置，放人濕盒內(nèi)，置37C溫箱中反應(yīng)，分別在24h一.一~一------一----一一一-一~--中華人民共和國國家質(zhì)f監(jiān)督檢驗檢疫總局2002-02-19批準(zhǔn)2002-05-01實施Gs/'r18643-2002和48h觀察結(jié)果。2

8、.2.2馬立克氏病抗體檢測操作方法同2.2.1，加樣如下:用微量移液器吸取用滅菌生理鹽水(見附錄A中A3)稀釋的標(biāo)準(zhǔn)抗原液(按產(chǎn)品使用說明書的要求稀釋)滴人中央孔，標(biāo)準(zhǔn)陽性血清分