洛鉑對肺癌a549細(xì)胞作用初步探討

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1、中文摘要洛鉑對肺癌A549細(xì)胞作用的初步探討摘要目的：肺癌是全球發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一，己成為目前人類因腫瘤死亡的主要原因，在我國農(nóng)村和城市近20年來己成為發(fā)病和死亡上升幅度最大的疾病，大多數(shù)患者就診時己喪失了手術(shù)機(jī)會，只有少數(shù)患者能進(jìn)行手術(shù)治療，因此化學(xué)治療在肺癌的治療中起著非常重要的作用。順鉑(cDDP)是目前發(fā)現(xiàn)的抗癌活性最強(qiáng)的藥物之一，被認(rèn)為是治療非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)一線方案中最主要的組成部分，但由于其嚴(yán)重的肝腎毒性和血液系統(tǒng)毒性使其在臨床的應(yīng)用受到限制，并且存在原發(fā)和繼發(fā)性耐藥，因此研發(fā)高療效低毒性的鉑類制劑一直是學(xué)者們努力的方向，洛鉑(Lobaplatin)化學(xué)名為l，2

2、二氨甲基一環(huán)丁烷一乳酸合鉑，是繼順鉑和卡鉑之后的第三代鉑類衍生物，其最主要的優(yōu)點是治療劑量下腎毒性和血液學(xué)毒性小及較輕的胃腸道反應(yīng)，可用于乳腺癌、肺癌和慢性粒細(xì)胞白血病等的化療治療。細(xì)胞凋亡是細(xì)胞自然死亡的一種毛要形式，由凋亡相關(guān)基兇控制，是維持機(jī)體自身平衡的重要機(jī)制．近年研究表明，細(xì)胞凋亡受抑制參與形成腫瘤，大多數(shù)化療藥物通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡起作用。因此對化療藥物細(xì)胞凋亡的研究具有十分重要的理論價值和臨床指導(dǎo)作用。Bcl-2是B細(xì)胞淋巴瘤／白血病一2(B—celllymphma／1eukemia一2)的縮寫。Bcl一2對細(xì)胞凋中文摘要亡有明顯的抑制作用，降低bcl-2的表達(dá)有利于細(xì)胞凋亡。Bc

3、l-2表達(dá)降低參與化療藥物引起的細(xì)胞凋亡，因此對Bcl一2的研究成為腫瘤細(xì)胞凋f：研究的熱點。本實驗以洛鉑為研究對象，以肺癌細(xì)胞株A549為模型，采用MTT比色法、流式細(xì)胞技術(shù)檢測洛鉑對肺癌細(xì)胞的增殖抑制、細(xì)胞周期阻滯、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等作用，應(yīng)用蛋白印跡法和免疫細(xì)胞化學(xué)法分析洛鉑對bcl一2蛋白表達(dá)的影響。為洛鉑在肺癌化療中的應(yīng)用提供相應(yīng)的理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。方法：(1)取對數(shù)生長期的肺癌A549細(xì)胞進(jìn)行實驗，實驗分組為：空白對照組(培養(yǎng)液)；陰性對照組(培養(yǎng)液+細(xì)胞)；實驗組(培養(yǎng)液+細(xì)胞+不同濃度洛鉑)；將各組分別培養(yǎng)24、48和72小時。(2)倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況及細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化

4、。(3)應(yīng)用MTT比色法檢測洛鉑對肺癌A549細(xì)胞增殖的影響。(4)應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡率的變化和影響。(5)應(yīng)用蛋白印跡法分析洛鉑對Bcl-2蛋白表達(dá)的影響。(6)統(tǒng)計學(xué)處理：采用SPSS統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。結(jié)果：洛鉑能抑制肺癌A549細(xì)胞的增殖；經(jīng)洛鉑處理A549細(xì)胞后，光鏡下可見到明顯的凋亡細(xì)胞；細(xì)胞周期的G1期前有低于二倍體細(xì)胞的凋亡峰；蛋白印跡檢測表明洛鉑可使bcl一2表達(dá)下降。(1)倒置顯微鏡下每天察陰性對照組、各度實驗組細(xì)胞大小和形態(tài)變化。陰性對照組肺癌A549細(xì)胞呈梭形，以貼壁方式生長，細(xì)胞輪廓清晰，細(xì)胞間結(jié)構(gòu)緊密，生長旺盛。濃度為2．5lamol／L矛

5、l：15lamol／L洛鉑作用24h后可見少量細(xì)胞變圓、體積中文摘要增大，大部分細(xì)胞仍貼壁生長，作用48h、72h后細(xì)胞縮小變圓，部分積聚成團(tuán)。10umol／L洛鉑作用24h后可見變圓細(xì)胞逐漸增多，貼壁生長細(xì)胞數(shù)量減少，脫壁漂浮的小圓球細(xì)胞及細(xì)胞碎片逐漸增多，48h可見變圓細(xì)胞較前增多，貼壁生長細(xì)胞減少，漂浮的小圓球細(xì)胞和細(xì)胞碎片增多，72h后可見大部分細(xì)胞積聚成團(tuán)。(2)應(yīng)用MTT比色法檢測洛鉑在不同濃度、不同時間對肺癌A549細(xì)胞株增殖的抑制作用，A549細(xì)胞出現(xiàn)明顯的增殖抑制，增殖抑制程度依賴于藥物濃度，隨濃度的升高和作用時間的延長而增大，具有呈時間和劑量依賴性。(3)洛鉑對A549細(xì)

6、胞周期變化的影響：洛鉑可以對肺癌A549細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞周期阻滯。(4)洛鉑對A549細(xì)胞凋亡率的影響：結(jié)果表明洛鉑可以誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡，而且隨著藥物濃度和作用時間的增加，凋亡率逐漸增加，呈時間和劑量依賴關(guān)系。(5)Western—blot檢測Bcl-2蛋白的表達(dá)可見隨洛鉑濃度的增高，凋亡率增高，Bcl-2的表達(dá)逐漸降低。提示我們洛鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡與Bcl-2蛋白的表達(dá)有一定關(guān)系。結(jié)論：洛鉑能顯著抑制肺癌A549細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期變化，并主要通過調(diào)節(jié)bcl-2等蛋白的表達(dá)來實現(xiàn)。關(guān)鍵詞：洛鉑；肺癌；A549細(xì)胞；細(xì)胞周期；凋亡；Bcl一2英文摘要Theinitialapproach

7、oneffectoflobaplatininlungcancercellline．A549ABSTRACTOBJECTIVE：Lungcanceristhemostprevalentmalignanttumorsintheworldandhasbecometheleadingcauseofdeath．InChina’Sruralandurbannear20years，themorbidityandmortal