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1、MSCs在膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)上的生長及分化研究2．實(shí)驗(yàn)試劑與器材DMEM～LG、標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清(FBS)、0．25％胰蛋白酶(含0．02％EDTA)、肝素鈉、磷酸鹽緩沖液(PBS)；曲拉通X-100，1％新潔爾滅溶液，10％硫酸慶大霉素溶液，搖床；細(xì)胞計(jì)數(shù)板；重組人VEGF。。，細(xì)胞計(jì)數(shù)板：二甲苯、無水乙醇、Mouse-anti—PanCytokeratin、sp免疫組化試劑盒、DAB顯色劑、蘇木素；戊巴比妥鈉(Pentobarbltalsodium)、外科手術(shù)器械等。3．骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)擴(kuò)增采用全骨髓法分離培養(yǎng)MSCs，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，行
2、流式細(xì)胞儀(FACScan流式細(xì)胞儀)檢測細(xì)胞表面抗原CD29、CD45。4．豬膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)的制備取新鮮豬膀胱，直視下分離去除漿肌層，保留粘膜及粘膜下層，以Triton—i100進(jìn)行萃取脫細(xì)胞處理。標(biāo)本作病理組織HE染色，觀察分析脫細(xì)胞效果。5．細(xì)胞一材料的體外復(fù)合培養(yǎng)、體內(nèi)分化實(shí)驗(yàn)5．1．種子細(xì)胞生長的微環(huán)境：取第三代大鼠MSCs，常規(guī)方法傳代，以含20％FBS、并添加VEGF(終濃度為25ng／L)的DMEM—LG培養(yǎng)液放入37"C、5％C0：飽和濕度的孵箱中培養(yǎng)。5．2．細(xì)胞一材料的體外復(fù)合培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)：材料剪成小塊置入24孔板內(nèi)，以DMEMLG培養(yǎng)液預(yù)
3、濕48h。將微環(huán)境培養(yǎng)的細(xì)胞以105／ml的密度接種到24孔板內(nèi)，黃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。取同期培養(yǎng)的MSCs作為對照。培養(yǎng)后第2天開始行細(xì)胞計(jì)數(shù)：每天各取每組的2孔消化離心進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，連續(xù)12天，繪制細(xì)胞生長曲線，將兩組曲線進(jìn)行對比。5．3．細(xì)胞一材料的體內(nèi)分化實(shí)驗(yàn)：材料剪成塊置入6iL板內(nèi)，以DMEM培養(yǎng)液預(yù)濕48h。將微環(huán)境培養(yǎng)的細(xì)胞以10i／ml的密度接種到6jL板內(nèi)，置培養(yǎng)箱培養(yǎng)14天。設(shè)未種植細(xì)胞的材料為對照組。將培養(yǎng)14d的細(xì)胞一材料復(fù)合物剪成小塊異位移植入12只大鼠背部，左邊植入實(shí)驗(yàn)組，右邊植入未種植細(xì)胞的材料作為對照，四周及八周后各取6只取材行病理
4、切片，檢查細(xì)胞在材料表面的生長情況及上皮的再生情況等?！SCs在膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)上的生長及分化研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果倒置顯微鏡下觀察原代培養(yǎng)貼壁生長良好，傳代后形態(tài)良好，增殖能力強(qiáng)，三代后以流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面抗原CD29陽性、CD45陰性，說明MSCs達(dá)到較高純度。．制備的豬BAM質(zhì)地柔軟，彈性良好，半透明，鏡下可見主要成份是膠原及彈性纖維，未見細(xì)胞成份。細(xì)胞一材料的體外復(fù)合培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)組與對照組的細(xì)胞有相似的生長曲線，說嘎細(xì)胞在材料表面生長良好，相容性較好。細(xì)胞一材料的體內(nèi)分化實(shí)驗(yàn)：細(xì)胞在材料上生長良好，四周時(shí)可見薄層、不連續(xù)的單層上皮細(xì)胞生長，實(shí)驗(yàn)組上皮細(xì)胞
5、角蛋白免疫組化陽性率50．0％，對照組陽性16．7％；八周時(shí)可見薄層、不連續(xù)的多層上皮生長，實(shí)驗(yàn)組上皮細(xì)胞角蛋白免疫組化陽性率83．3％，對照組陽性率16．7％。結(jié)論制備的細(xì)胞與材料具有良好的相容性，體內(nèi)可向上皮細(xì)胞分化生長；復(fù)合物與體內(nèi)組織具有良好的相容性。MSCs和BAM可作為構(gòu)建組織工程膀胱的材科。關(guān)鍵詞：骨髓問充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)；膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)(BAM)；生長；分化。l¨MSCs在膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)上的生長及分化研究PreliminaryExperimentalStudyonMSCsCultureandDifferentiationonBAMoBJE
6、CTIVESMasterCandidate：LiuZuo—qiangTutor：Prof．HuangJianABSTRACTThebladderdefectcausedbycongenitalmalformation,trauma,Ortulnorere．,needsthebladderreconstruction．Traditionalmethodstoreconstructthebladdergo砸tllmanysubsequentcomplications．Tissueengineeringfollowstheprinciplesofcelltrans
7、plantation,materialsscience,andengineeringtowardthedevelopmentofbiologicalsubstitutesthatwouldrestoreandmaintainnormalfunction．Mesenchymalsterncells(MSCs)wereculturedandDifferentiatedtoepitheliumcellsinthispreliminaryexperimentalstudy．MATERIALSANDMETHoDS1．Animals：Onemonth—oldSDmous
8、eweighing80--lOOgWereusedi
