姬松茸多糖的提取純化與注射液的研制

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1、姬松茸多糖的提取純化及注射液的研制摘要姬松茸(AgaricusblazeiMurill，ABM)是近年來新興的一種食藥兼用菌，因其富含多種活性成份，可作為免疫調(diào)節(jié)劑、抗癌劑、抗突變劑和抗菌物質(zhì)的來源，因而引起全世界的極大關(guān)注。由于姬松茸具有多種生物活性，具有廣泛的應(yīng)用價值和前景，因而對其活性成分的提取分離就顯得尤為重要。對于姬松茸多糖的提取分離純化過程國內(nèi)外有很多報道，技術(shù)比較成熟，但是以姬松茸多糖為主原料的保健食品或抗癌藥物目前還少有報道。本論文以姬松茸粗多糖為原料，開發(fā)姬松茸多糖注射液，為其作為一種新型的抗癌輔助藥物走向市場奠定實驗依據(jù)。為保證姬松茸多糖注射液的安全

2、性，根據(jù)《中華人民共和國藥典》及《中藥、天然藥物提取純化工藝的相關(guān)規(guī)定》。選取了經(jīng)濟、安全、高效的分離、純化、濃縮和干燥方法。首先Sevage法除蛋白，根據(jù)文獻，確定氯仿：正丁醇為3：1，多糖濃度2nag·mL-1時，重復(fù)三次，除蛋白效果最佳；脫色采用了雙氧水氧化法，為加快脫色時間，又要避免雙氧水對多糖結(jié)構(gòu)的破壞，實驗在37℃下進行：透析、濃縮、干燥過程同樣為了保證多糖結(jié)構(gòu)的完整性和提取后物質(zhì)疏松易溶解，先透析，然后60℃濃縮，最后是冷凍干燥。此時得到的多糖半純品(AB)呈褐色，粉末狀，經(jīng)苯酚硫酸法和考馬斯亮藍G250法鍘得總糖含量和蛋白質(zhì)含量分別為85．4％和14．2

3、％。多糖半純品通過DEAE．纖維素離子交換層析進行初步分級純化，用0、0．1、O．3tool·L_1的NaCl洗脫，得到三個組分，分別是AB．I、AB．II和AB．1II，其中AB．I為中性多糖，AB．II和A&Ⅲ為酸性多糖。AB—I、AB．II和AB．In分別再通過SepharoseCL-4B凝膠層析迸一步分級，A良I得到單一對稱峰，透析干燥后為淡黃色粉末，AB．II和AB．IIl在主峰之前分別有一小峰，收集主峰，得到AB．II．b和AB．m．b，透析干燥后分剮呈黃色和褐色粉末。A西I、AB—II—b和AB—HI．b經(jīng)純度鑒定后，表明為均一的多糖，總糖含量為91．8％

4、、90．4％和89．2‰蛋白質(zhì)含量為7．1％、S．8％和9．3％。為了進一步探討分離純化的多糖半純品AB及其組分AB．I、AB．II-b和AB．III．b的免疫藥理作用，我們使用環(huán)磷酰胺建立-rd,鼠免疫低下模型，并對多糖處理前后小鼠的免疫功能變化情況進行了檢測，如免疫器官重量試驗、外周血血象測定、腹腔巨噬細胞吞噬試驗、溶血素生成試驗、E玫瑰花環(huán)形成試驗、淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗，從非特異性免疫、細胞免疫和體液免疫方面全面檢測它們的免疫藥理作用。結(jié)果表明環(huán)磷酰胺致小鼠免疫低下模型建立成功，四個多糖均能弱化環(huán)磷酰胺對機體的毒副作用，并且有的指標能達到空白對照組水平，正常／JV鼠經(jīng)

5、四個多糖免疫后，與空白對照組相比除淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗外，均為差異極顯著(P

6、對注射液的中間體進行質(zhì)量安全性試驗：急性毒性試驗、肌肉局部刺激試驗、過敏試驗和溶血試驗，試驗結(jié)果均符合相關(guān)規(guī)定，表明姬松茸多糖注射液可以用于肌肉注射和靜脈注射，無毒副作用，不會產(chǎn)生不良后果。綜上所述，姬松茸多糖是一種良好的免疫增強劑，可以弱化環(huán)磷酰胺對機體的毒副作用，初步制得注射液后，肌肉和靜脈注射對機體無不良效果，如果應(yīng)用于臨床可與常規(guī)化療藥物配伍使用，加大療效，保護正常細胞免受藥物損傷，因此可以開發(fā)作為新型抗癌輔助藥物，造福人類。關(guān)鍵詞：姬松茸，多糖，提取純化，免疫低下，注射液TheExtractionandPurificationandInjectionPrepa

7、rationofPoIysaccharidefromAgaricusB／azeiMuriIAbstractAgaricusblazeiMurill(ABM)isakindofnewedibleandmedicalfungusinrecentyeats．Thismushroomhasbeenattractingattention笛a$otn'ceofimmunomodulators，anticarcinogem，antimutigensand齟tib∽terialsubstances．Itcontainsrichbiologicalacti