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《骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外向胰島樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化的實驗研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、四川大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)博士學(xué)位論文中英文縮略詞英文縮寫英文全稱中文全稱BMSCsboneHIalTOWmesenchymalsterncells骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞bpbasepair堿基對BSAbovinese九IInalbumin牛血清白蛋白BTCbetacellulin口細(xì)胞調(diào)節(jié)素DABdiaminobenzidine二氨基聯(lián)苯胺DEPCdiethylpyrocarbonate焦碳酸二乙酯DMSOdimethylsulfoxidc二甲亞砜EPeppendoff微量離心管FBSfetalbovinesertlln胎牛血清FIT
2、Cfluoresceinisothiocyanate異硫氰酸熒光素GLP-1glucagon-likepeptide-1胰高血糖素樣肽一lHEPES4-(2一Hydroxyethyl)-I·piperazincethancsulfonicacid羥乙基哌唪乙磺酸WCsinsulin-producingcells胰島素分泌細(xì)胞mRNAmessengerribonucleicacid信使核糖核酸PBSphosphatebuffcredsolution磷酸鹽緩沖溶液PCRpolymcrascchainreaction聚合酶聯(lián)反
3、應(yīng)PDX一1pancreaticduodenalhome．box—l胰島／十二指腸同源框一1PEphycoerythrin藻紅蛋白RNAribonucleicacid核糖核酸rpmrevolutionperminute每分鐘轉(zhuǎn)速RT-PCRl∞vcTsetranacription-polymerasechainreaction逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(yīng)ThEIris-aceticacideleOrophoresisbufferTris一乙酸電泳緩沖液聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)
4、我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得四JII；t：學(xué)或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。本學(xué)位論文成果是本人在四川大學(xué)讀書期間在導(dǎo)師指導(dǎo)下取得的，論文成果歸四川大學(xué)所有，特此聲明。申請人：愛海點指導(dǎo)教師：圓敞四川大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)博士學(xué)位論文論文摘要第一部分大鼠骨髓間充質(zhì)千細(xì)胞的體外分離、培養(yǎng)及鑒定摘要背景與目的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)是存在于骨髓中的一種具有自我更新和多
5、向分化潛能的細(xì)胞。研究表明骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以向內(nèi)胚層、中胚層和外胚層組織細(xì)胞分化，如肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和胰島素分泌細(xì)胞等。本研究旨在體外分離培養(yǎng)大鼠BMSCs，觀察BMSCs的生物學(xué)特性，并采用流式細(xì)胞檢測技術(shù)鑒定BMSCs。為進(jìn)一步觀察體外BMSCs向胰島素分泌細(xì)胞分化奠定基礎(chǔ)。材料與方法Wister大鼠麻醉致死后，無菌條件下取出脛骨和股骨用L-DMEM培養(yǎng)基從骨腔一端沖洗骨髓腔，沖出骨髓，輕柔充分吹打成單細(xì)胞懸液，離心洗滌后，所得細(xì)胞按lXi08／mE密度接種于25cm2塑料培養(yǎng)瓶中，37
6、℃，5％CO。，飽和濕度下培養(yǎng)48小時，首次更換培養(yǎng)液，棄去未貼壁細(xì)胞，此后每2-3天換液1次，觀察細(xì)胞形態(tài)變化。待細(xì)胞生長良好，80％融合后，傳代培養(yǎng)。取第3或4代細(xì)胞做流式細(xì)胞檢測，檢測獲得的貼壁細(xì)胞表面標(biāo)記抗原CD29、CD90和CD45表達(dá)情況。結(jié)果在最初培養(yǎng)的48h內(nèi)，可見大量圓形細(xì)胞，懸浮生長。48h后可見部分細(xì)胞呈貼壁生長。至第5天時，隨著換液次數(shù)的增加，圓形懸浮細(xì)胞逐漸減少，貼壁細(xì)胞明顯增多，呈聚集樣生長，細(xì)胞形態(tài)呈梭形和多角形。約10-14天后細(xì)胞鋪滿瓶底，呈魚叢狀或漩渦狀聚集，細(xì)胞形態(tài)呈梭形。流式細(xì)胞
7、方法檢測大鼠BMSCs的表面標(biāo)記抗原。結(jié)果顯示：2四川大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)博士學(xué)位論文第三代大鼠BMSCs的特異性表面標(biāo)志物：CD29陽性，陽性率為91．9％；CD45陰性，陽性率為6．996；CD29／CD45陽性率為7．4％；CD90陽性，陽性率為51．3％；CD90／CD45陽性率為3．6％。結(jié)論本實驗通過貼壁篩選法和全骨髓培養(yǎng)法成功分離培養(yǎng)了大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。關(guān)鍵詞骨髓，間充質(zhì)干細(xì)胞，大鼠四川大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)博士學(xué)位論文第二部分人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外向胰島樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化實驗研究摘要目的探討聯(lián)合應(yīng)用高糖和GLP．1、活化素
8、A、尼克酰胺和B細(xì)胞調(diào)節(jié)素刺激體外能否誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向胰島樣細(xì)胞分化。材料與方法體外培養(yǎng)人骨髓問充質(zhì)干細(xì)胞，待細(xì)胞80％融合時，用0．1％胰蛋白酶消化傳代，按2×105／ml接種于96孔板。觀察細(xì)胞生長情況。采用以下誘導(dǎo)刺激方案：先給予23n肋ol／L高葡萄糖刺激約20天，接著再將刺激后細(xì)胞分為7組，分別給予
