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《人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外向肝樣細(xì)胞的誘導(dǎo)分化論文》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外向肝樣細(xì)胞的誘導(dǎo)分化論文【摘要】目的：研究人骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞(humanbonemarroesenchymalstemcells，hBM-MSCs)在肝細(xì)胞生長因子(HGF)、成纖維細(xì)胞生長因子-4(FGF-4)、抑瘤素M(OSM)誘導(dǎo)下，體外向肝樣細(xì)胞的誘導(dǎo)分化。方法：通過密度梯度離心和貼壁培養(yǎng)法獲得hBM-MSCs，分離的hBM-MSCs擴(kuò)增傳至第6代，流式細(xì)胞儀檢測hBM-MSCs表面CD34、CD45、CD105、CD166表達(dá)。第6代hBM-MSCs生長達(dá)100%融合時(shí)采用兩步法對hBM-MSCs進(jìn)行誘導(dǎo)
2、分化。第1～第14天采用IMDM誘導(dǎo)培養(yǎng)基(含2%FCS、20ng/mLHGF、20ng/mLFGF-4)，第15～第21天在上述培養(yǎng)基中加OSM(10ng/mL)，促進(jìn)誘導(dǎo)細(xì)胞的成熟，同時(shí)收集第0、第7、第14、第21天培養(yǎng)上清液標(biāo)本.freelanbonemarroesenchymalstemcellsintohepatocyte-likecellsinducedbyhepatocytegroalstemcells(MSCs)fromhumanbonemarroetryedusingthefolloouseanti-humanantibo
3、dies:anti-CD34FITC，anti-CD45FITC，anti-CD105PE，anti-CD166APC.ThesixthgenerationMSCsethed.Differentiationedium，consistingofIMDMsupplementedLHGFand20ng/mLFGF-4for14days，folloentaturationmedium，consistingofIMDMsupplementedLHGF，20ng/mLFGF-4，10ng/mLoncostatinM.MediumchangesedtRNA
4、ofALBandCK18erasechainreaction.ProductionofALBandCK18munofluorescenceanalysisandElisa.GlycogendepositshumanboneexpressedCD105andcd166，andorphologyandfunctionofhepatocytes.Cellolarmorphologychangedfromaspindletoaratherpolygonalshapetypically.DifferentiatedhBM-MSCsarkers，such
5、asCK-18(cytokeratin18)andALB(albumin).Moreover，secretionofALBbydifferentiatedhBM-MSCsincreasedasculturetimeanbonemarroesenchymalstemcellscandifferentiateintohepatocyte-likecellsinresponsetoHGF，F(xiàn)GF-4andOSM，aybeusedasakindofcellresourcestotreatseverehepaticdisease.Keyesenchym
6、alstemcells;humanbonemarroesenchymalstemcells;hepatocyte-like;cytokine肝細(xì)胞移植、生物型人工肝是治療肝衰竭的有效手段，卻面臨肝細(xì)胞來源缺乏的困境，因此尋找新的肝細(xì)胞源代替成體肝細(xì)胞尤為迫切1-2。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(humanbonemarroesenchymalstemcells，hBM-MSCs)體外容易分離，免疫原性弱，可大量擴(kuò)增3，把hBM-MSCs定向分化為肝細(xì)胞，將對肝病的治療帶來新的思路和新的前景。當(dāng)前對骨髓體外向肝樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，細(xì)胞因子之間組合
7、、誘導(dǎo)分化時(shí)細(xì)胞生長融合狀態(tài)也有爭議。本實(shí)驗(yàn)探討了生長100%融合時(shí)的hBM-MSCs，在肝細(xì)胞生長因子(HGF)、成纖維細(xì)胞生長因子-4(FGF-4)、抑瘤素M(OSM)誘導(dǎo)培養(yǎng)下，向肝樣細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，從而為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對肝衰竭的治療提供理論依據(jù)。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)材料骨髓由浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院骨髓室提供。L-DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清(FCS)、PAS染色液、0.25%胰蛋白酶購于GIBCO公司，F(xiàn)icoll分離液購于StemCell公司，鼠抗人FITC-CD34，F(xiàn)ITC-CD45，PE-CD105，APC-CD166抗體購于
8、美國BD公司，HGF，F(xiàn)GF-4，OSM購于Peprotec公司，RNA提取試劑盒購于Invitrogen公司，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購于Promega公司，PCR試劑盒購于
