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《參附注射液、松果菊苷和蟲(chóng)草素等抗腫瘤活性與對(duì)gjic的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、參附注射液，松果菊苷和蟲(chóng)草素等抗腫瘤活性及對(duì)G兒e竹影響中文摘要研究目的迄今，惡性腫瘤仍然是嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的疾病，盡管已有很多抗腫瘤藥物應(yīng)用于臨床，但由于在很多情況下，效果仍然很不理想，再加上毒副作用大和耐藥性的原因，因此人們正在努力尋找新的抗腫瘤藥物。中醫(yī)藥累積了不少防治腫瘤的經(jīng)驗(yàn)。研究與臨床均證實(shí)，中醫(yī)藥以復(fù)方治療為主，成分較復(fù)雜，具體到某種藥或復(fù)方時(shí)，療效尚難確切肯定，穩(wěn)定性與重復(fù)性往往不高，藥理機(jī)制及靶點(diǎn)尚不明確，這些均有待深入研究。因此，中藥抗腫瘤的研究，無(wú)論是國(guó)外還是國(guó)內(nèi)，仍然方興未艾。研究表明，具有直接細(xì)胞生長(zhǎng)抑制或殺
2、傷作用的中藥活性成分有姜黃素、B一欖香烯、苦參堿、大蒜素、紫杉醇、丹參酮、羥基喜樹(shù)堿等。GJIC與腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，加強(qiáng)GJ能作為治療腫瘤的一個(gè)手段。但有關(guān)中藥與GJIC的研究尚少，已報(bào)道的有車(chē)前草的乙醇提取成分、丹參酮IIA等。本研究的創(chuàng)新點(diǎn)在于采用對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制或殺傷作用進(jìn)行篩選與GJIC的相關(guān)活性篩選相結(jié)合，初步找出具有直接細(xì)胞生長(zhǎng)抑制或殺傷作用的中藥活性成分，并探求能提高GJIC的活性成分，從而為中藥的臨床應(yīng)用和作用新靶點(diǎn)的研究提供新的參考資料。實(shí)驗(yàn)方法1五種惡性腫瘤細(xì)胞株的生長(zhǎng)時(shí)間和密度的測(cè)定實(shí)驗(yàn)采用活細(xì)胞增
3、殖AlamarB1ue試劑分別測(cè)定人胃癌細(xì)胞株SGC一7901、人肝癌細(xì)胞株Hep-G2、人急性早幼粒白血病細(xì)胞株HL一60、小鼠肝癌細(xì)胞株H22和小鼠黑素瘤細(xì)胞株B16五種腫瘤細(xì)胞株在不同濃度各個(gè)時(shí)間段的吸光值，根據(jù)其還原率確定最佳的細(xì)胞生長(zhǎng)條件。2中藥活性成分抗腫瘤活性研究2．1所選藥物黃芪甲苷、人參皂苷Rh2、人參皂苷R93、淫羊藿苷、川續(xù)斷皂苷、阿魏酸、松果菊苷、葫蘆巴堿、蟲(chóng)草素、靈芝多糖、靈芝三萜和參附注射液。2．2細(xì)胞增殖抑制或殺傷實(shí)驗(yàn)分別收獲對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人胃癌細(xì)胞SGC一7901、人肝癌細(xì)胞Hep—G2和小鼠黑素瘤細(xì)胞B
4、16，按照每孔4000個(gè)細(xì)胞接種入96孔板。過(guò)夜培養(yǎng)24h后加藥。收獲人白血病細(xì)胞HL一60和小鼠肝癌細(xì)胞H22，按照每孔4000個(gè)細(xì)胞接種入96孔板后加藥。黃芪甲苷、人參皂苷Rh2、人參皂苷R93、淫羊藿苷、川I續(xù)斷皂昔、阿魏酸、松果菊苷、廣州中醫(yī)藥大學(xué)2007屆博士學(xué)位論文葫蘆巴堿和蟲(chóng)草素設(shè)6個(gè)濃度，終濃度分別為OⅢ、5州、lOlabl、20labl、40Ⅲ和80州；靈芝多糖和靈芝三萜設(shè)6個(gè)濃度，終濃度分別為Omg／L、5mg／L、lOmg／L、20mg／L、40mg／L和80mg／L；參附注射液設(shè)6個(gè)濃度，終濃度分別為OmL／L
5、、5mL／L、IOmL／L、20mL／L、40mL／L和80mL／L，每個(gè)濃度設(shè)5個(gè)復(fù)孔，補(bǔ)足180p1培養(yǎng)液于37℃、5％C0。及飽和濕度條件下培養(yǎng)。每孔加入20111AlamarBlue，用酶標(biāo)儀分別測(cè)定Oh、24h、48h和72h，570nm和630nm波長(zhǎng)的吸收值，按照說(shuō)明書(shū)的公式，計(jì)算每個(gè)濃度及時(shí)間段存活率。存活率=!!!墅蘭!竺：!!塑墜!×10034798×A0570-80586×Ao。30其中，A。，。和Ae30分別是藥物處理組細(xì)胞在570hm和630nm波長(zhǎng)的吸收值，A‰和A06。分別是對(duì)照組細(xì)胞在570hm和630
6、hm波長(zhǎng)的吸收值。以細(xì)胞存活率為縱坐標(biāo)，藥物濃度為橫坐標(biāo)，繪制各組細(xì)胞的生存曲線，并計(jì)算藥物對(duì)細(xì)胞的Ic。值。2．3流式細(xì)胞儀分析把人白血病細(xì)胞HL-60按每孔約2．5×106個(gè)細(xì)胞接種到六孔板中，分為對(duì)照組，松果菊替20Ⅲ、松果菊苷40P2d、蟲(chóng)草素20／j．M、蟲(chóng)草素401AM、參附注射液20mL／L和參附注射液40mL／L共7組，每組3復(fù)孔。藥物孵育48h后，各組細(xì)胞經(jīng)胰酶消化收集后PBS洗3次，用預(yù)冷的70％乙醇固定后，PI染色，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行凋亡率和細(xì)胞周期分析檢測(cè)。2．4瓊脂糖凝膠電泳分別收集經(jīng)過(guò)參附注射液不同濃度處理過(guò)
7、的H22細(xì)胞，PBS洗滌后采用申能博彩生物科技有限公司試劑盒步驟提取細(xì)胞DNA，取7uLDNA提取液加溴芬蘭3
8、lL，上樣于i．5％瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳(電壓30V，2h)，UV下觀察結(jié)果，用凝膠成像系統(tǒng)拍照。3中藥活性成分對(duì)GJIC和Cx43表達(dá)的影響對(duì)參附注射液和松果菊苷、蟲(chóng)草素等十一種補(bǔ)益中藥活性成分中，分為正常對(duì)照組、芹黃素陽(yáng)性對(duì)照組、18一d甘草酸陰性對(duì)照組、黃芪甲苷組、人參皂苷Rh2組、人參皂苷R93組、淫羊藿苷組、川續(xù)斷皂苷組、阿魏酸組、松果菊苷組、葫蘆巴堿組、蟲(chóng)草素組、靈芝多糖組、靈芝三萜組和參附注射液組共15組。藥物孵
9、育36h后進(jìn)行熒光染料劃痕實(shí)驗(yàn)，初步篩選出對(duì)GJIC有作用的藥物，并對(duì)比這些中藥活性成分對(duì)Cx43表達(dá)的影響。觀察LY自傷沿列細(xì)胞向鄰近細(xì)胞傳遞的距離進(jìn)行半定量檢測(cè)。FITC間接免疫熒光法通過(guò)FITC標(biāo)記的Cx43抗體特
