松果菊苷對秀麗隱桿線蟲壽命的影響及分子機理研究

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1、Ａ斬Ｉ矣＊ｆＴＩＡＮＪＩＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ中固第－所現(xiàn)代大學ＦＯＵＮＤＥＤＩＮ１８９５點‘全日制專業(yè)學位碩±學位論文■ＩＫＷＭＭＩＷＷ］■叫ｌ＾＾＾■１■ＩＢ關■ｉＷｌＨｉｆｌＭＷＷｉｙｙＵＷＭ—ＷｑＷ＾＾Ｂ：ＭＭ學科專業(yè)：藥學．作者船：ｎ指導教師：周立軍副教授，＇豕＾■ｆ．；．秦非識；＾Ｐ１參天津大學研究生院匯２０１５年５月松果菊苷對秀麗隱桿線蟲壽命的影響及分子機理研究TheeffectofechinacosideonCaenorhabditiseleganslifespanan

2、ditsmolecularmechanism學科專業(yè)：藥學研究生：王雪指導教師：周立軍副教授天津大學藥物科學與技術學院二零一五年五月獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作和取得的研究成果，，除了文中特別加Ｗ標注和致謝之處外論文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得天津大學或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中。與我作Ｔ明確的說明并表示了謝意。一■簽字日期：學位論文作者簽名：巧年＾月％日學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解天津大學有關保留

3、、使用學位論文的規(guī)定。特授權天津大學可杉、將學位洽文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索、匯編供查閱和借閱。同意學校，并采巧影印、縮印或掃描等復制手段保存向國家有關部口或機構送交論文的復印件巧磁盤。（保密的學位論文在解密后適用本授權說明）學位論文ｆ儲簽備ｊ／＇Ｊ簽字日期年月日簽字日期：＾５年ｒ月＾＾＾日中文摘要松果菊苷（Echinacoside，ECH）是一種植物多酚化合物，最初于北美松果菊屬狹葉松果菊分離出來。后經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，肉蓯蓉中可以提取出大量高純度的松果菊苷。目前報道松果菊苷的藥理作用有抗氧化、抗炎、神經(jīng)保護、保護肝臟、清除自由基

4、等。但是尚沒有文獻報道松果菊苷是否具有體內(nèi)抗衰老活性。目的：本研究旨在評價松果菊苷對于線蟲壽命的延長作用并探討松果菊苷延長線蟲壽命的作用機制。方法：1.壽命實驗：線蟲分為松果菊苷0μM（對照組）、50μM、150μM、300μM、600μM組，通過壽命實驗初步判斷藥物的抗衰老效果，并篩選出最佳體外給藥濃度。2.壓力應激實驗：進行37℃熱應激實驗、百草枯氧化應激實驗,佐證壽命實驗同時檢測松果菊苷是否通過提高線蟲壓力應激能力延長線蟲壽命。4.產(chǎn)卵實驗：對比給藥組線蟲和空白組線蟲的產(chǎn)卵時期和產(chǎn)卵量，檢測松果菊苷在延長線蟲壽命的同時是否影響其生殖能力。4.咽泵實驗：通過對比給藥組線蟲

5、和空白組線蟲每分鐘的咽泵次數(shù)，檢測藥物對于線蟲攝取食物能力的影響。5.daf-16(mgDf50)突變株壽命實驗：線蟲分為松果菊苷0μM（對照組）、300μM組，檢測松果菊苷對daf-16基因缺失突變線蟲壽命的影響。6.DAF-16的亞細胞定位實驗：在熒光顯微鏡下觀察DAF-16::GFP轉基因蟲株經(jīng)300μM松果菊苷處理后DAF-16::GFP的亞細胞定位情況。7.熒光定量PCR實驗：對線蟲給藥一段時間后，提取線蟲總RNA，利用熒光定量PCR實驗檢測線蟲體內(nèi)DAF-16下游基因sod-3,hsp-16.2和ctl-1的表達量的變化。結果：1.松果菊苷在適宜的濃度范圍內(nèi)可以延

6、長線蟲的壽命，300μM為最佳用藥劑量。2.300μM松果菊苷能提高線蟲在急性熱應激和急性氧化應激環(huán)境下的生存率，進一步證實了松果菊苷具有抗衰老的作用。3.松果菊苷在延長壽命的同時不會損害線蟲的生殖能力。4.松果菊苷不影響線蟲的咽泵頻率，提示我們藥物的抗衰老作用不是通過熱量限制途徑實現(xiàn)的。5.分子機制研究表明：松果菊苷促進DAF-16向細胞核內(nèi)聚集并因此提高了DAF-16的轉錄活性，從而延長線蟲壽命。結論：綜上所述，我們評價了松果菊苷對線蟲壽命的延長作用,并對其作用機制進行了初步的探索，為松果菊苷的延壽功效提供了實驗依據(jù)?？紤]到daf-16是一個從線蟲到哺乳動物高度保守的轉錄

7、因子，我們的研究有助于將松果菊苷應用于人體衰老相關疾病的治療。關鍵詞：松果菊苷；長壽；daf-16；秀麗隱桿線蟲ABSTRACTEchinacoside(ECH)isanaturalphenylethanoidglycosides(PhGs)foundinvariousspeciessuchastheEchinaceaangustifoliaandthepopulartraditionalChineseherbalmedicineCistanchetubulosa.Ithasbeenreportedth