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《轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌的早期診斷》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、中山大學碩士學位論文轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌的早期診斷專業(yè)：臨床檢驗診斷學研究方向：基因診斷姓名：白恩琪導師：何蘊韶教授摘要結(jié)直腸癌是嚴重危害人類健康的常見惡性腫瘤之一，位居歐美發(fā)達國家和地區(qū)惡性腫瘤發(fā)病和死因的第二和第三。近二十余年來，隨著我國居民生活方式和膳食結(jié)構(gòu)的改變，結(jié)直腸癌的發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢。目前，結(jié)直腸癌的手術(shù)療效已有所改觀，而復發(fā)和轉(zhuǎn)移是臨床醫(yī)師面臨的主要難題。在分期較早的病人中，可能存在未被常規(guī)病理形態(tài)學或臨床檢查所發(fā)現(xiàn)的微轉(zhuǎn)移。因此，從分子水平對結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移早期發(fā)現(xiàn)和診斷是提高術(shù)后生存率的關(guān)鍵所在。本研
2、究針對石蠟包埋組織RNA的提取方法進行了研發(fā)，并建立了一種可應用于臨床的提取方法；針對RNA定量的需要，建立了可直接用于RT—PCR的定量參考品；采用TaqMan實時熒光定量RT—PCR(qRT—PCR)方法對鳥苷酸環(huán)化酶C(guanylylcyclaseC，GCC)mRNA在結(jié)直腸癌組織、配對正常粘膜及淋巴結(jié)中的表達水平進行檢測，分析GCC基因mRNA在結(jié)直腸癌中的表達情況，建立了一種可以用于結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的早期標記物檢測方法。第一部分石蠟包埋組織中總RNA的提取和純化目的：建立一種從福爾馬林固定、石蠟包埋組織提取和純
3、化總RNA的簡便、快速的方法。方法：從廣州達安臨床檢驗中心病理科收集石蠟包埋標本20例，其中2008年新鮮包埋的標本有6例，2006年和2007年包埋標本各5例，2005年包埋標本7例，這些標本涉及到了子宮肌瘤，闌尾炎，大腸癌，胰腺炎，肝癌等。每例標本均切取5中山大學碩士學位論文轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌的早期診斷張10um厚切片，運用硅膠?！x心柱法從石蠟包埋組織中提取RNA，以經(jīng)典的AGPC(酸一異硫氰酸胍一苯酚一氯仿法，acidguanidiumthiocyanate—phen01chloroformextraction，A
4、GPC)法做對照。提取總RNA經(jīng)紫外分光光度計測定純度，瓊脂糖凝膠電泳和管家基因TBP檢測所提RNA的質(zhì)量。結(jié)果：20例石蠟包埋組織中提取的總RNA經(jīng)過紫外分光光度儀測定后，260nm與280nm光密度比在1．8～2．O；經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分析，部分樣本可以看到預期的目的條帶。經(jīng)過熒光定量RT—PCR檢測，所有樣本提取的RNA都能擴增出TBP片段。結(jié)論：硅膠模一離心柱法提取石蠟包埋組織中的RNA簡便、經(jīng)濟、快速，可用于臨床研究。關(guān)鍵詞：石蠟包埋組織；RNA提?。坏鞍酌窴第二部分GCC定量標準品的制備目的：應用體外轉(zhuǎn)錄的方
5、法，制備定量GCCmRNA的標準品，用于熒光定量RT—PCR檢測。方法：提取結(jié)直腸癌組織總RNA，RT—PCR擴增后用PMD—18T載體連接構(gòu)建重組質(zhì)粒，應用體外轉(zhuǎn)錄的方法，即用帶有T7啟動子序列和P01yT序列的引物對目的基因和內(nèi)參照進行PCR，克隆入PMD一18T載體進行體外合成GCC和TBP的cRNA模板。合成的cRNA定量和稀釋后，進行逆轉(zhuǎn)錄和實時PCR，即可得到cRNA標準曲線。結(jié)果：cRNA定量的線性范圍達5個數(shù)量級，相關(guān)系數(shù)為O．99。結(jié)論：成功制備了定量GCC的標準品，可應用于熒光定量RT—PCR定量檢
6、測。關(guān)鍵詞：熒光定量RT—PCR，mRNA定量，標準曲線第三部分GCC在轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌中的表達研究目的：研究鳥苷酸環(huán)化酶C(GCCmRNA)在結(jié)直腸癌中的表達并探討其意義。方法：提取57例結(jié)直腸癌腫瘤組織、癌旁正常組織以及癌旁淋巴結(jié)中總mRNA，應用熒光定量RT—PCR的方法檢測GCC表達情況。利用第二部分構(gòu)建的標準品采用絕對定量的方法分析結(jié)果，最后應用SPSS統(tǒng)計學軟件進行分析。結(jié)果：1．GCC在正常結(jié)直腸組織及結(jié)直腸癌組織中均有表達，但在結(jié)直腸癌組織中的中山大學碩士學位論文轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌的早期診斷表達明顯較正常結(jié)直
7、腸組織中的表達強(P<0．05)，且其表達的強弱與腫瘤的分期和解剖部位無關(guān)。2．在結(jié)直腸癌患者中，28例病理診斷陽性的淋巴結(jié)中27例檢出GCCmRNA，陽性檢出率為96．43％(27／28)，29例常規(guī)病理陰性病例中5例檢測到GCCmRNA的表達。結(jié)論：1．GCC在結(jié)腸癌組織中的表達明顯增強，表達強度與腫瘤的分期和解剖部位無關(guān)。2．GCC在結(jié)直腸癌患者淋巴結(jié)中的表達與腫瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān)，GCCmRNA表達對于臨床診斷結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移具有重要意義。3．熒光定量RT—PCR法檢測GCCmRNA表達快速，準確，可以提高淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移檢
8、出率。關(guān)鍵詞：鳥苷酸環(huán)化酶C，TATA結(jié)合蛋白，結(jié)直腸癌小結(jié)：1．硅膠膜一離心柱法提取石蠟包埋組織中的RNA簡便、經(jīng)濟、快速，可用于臨床研究。2．制備定量GCC的標準品，可應用于熒光定量RT—PCR定量檢測。3．GCC在結(jié)腸癌組織中的表達明顯增強，表達強度與腫瘤的分期和解剖部位無關(guān)。4．GCC在結(jié)直腸癌患者淋巴結(jié)中的表達與腫瘤的轉(zhuǎn)
