早期結(jié)直腸癌基因診斷的研究進(jìn)展.doc

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1、早期結(jié)直腸癌基因診斷的研究進(jìn)展【關(guān)鍵詞】直腸癌基因診斷結(jié)直腸癌是我國(guó)常見的惡性腫瘤之一,我國(guó)1990～1992年27個(gè)省,自治區(qū),直轄市惡性腫瘤死亡抽樣調(diào)查(約占同期人口10%)結(jié)果發(fā)現(xiàn),結(jié)直腸癌發(fā)病率以4%的年增長(zhǎng)率迅速升高,目前占消化道腫瘤的第二位[1]。所謂早期結(jié)直腸癌一般指DukesA期癌，系指癌腫浸潤(rùn)深度達(dá)黏膜下層和固有肌層。由于結(jié)直腸黏膜內(nèi)無(wú)淋巴管存在，所以早期結(jié)直腸癌一般不會(huì)發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，可以治愈，若能發(fā)現(xiàn)DuckesA期則可以提高生存率。待患者出現(xiàn)癥狀時(shí)才來(lái)就診，已非早期，故結(jié)直腸癌的早期診斷就顯得尤為重要。許多研究表

2、明，結(jié)直腸癌變是一個(gè)涉及原癌基因激活、抑癌基因失活等多基因、多階段、多步驟漸進(jìn)演化的積累過(guò)程。與結(jié)直腸癌相關(guān)的抑癌基因有p53、APC、DCC等，原癌基因有Kras、cmyc等。因此測(cè)定與結(jié)直腸癌發(fā)生密切相關(guān)的基因有助于早期結(jié)直腸癌的診斷。1CD44人的CD44基因位于第11號(hào)染色體短臂上,大小約60kb,含有20個(gè)外顯子。其中外顯子6～15(即V1～V10)在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中易于通過(guò)選擇性剪接形成剪接變異體,即CD44V。CoppolaD等[2]對(duì)34例結(jié)直腸癌切除標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn):腺瘤中CD44V6檢出率為100%,癌為91%,轉(zhuǎn)移

3、灶最弱,僅38%,因此認(rèn)為D44V6的表達(dá)是結(jié)直腸癌的早期標(biāo)志。國(guó)內(nèi)吳健雄[3]等的研究證實(shí):CD44VmRNA在結(jié)直腸癌中的異常表達(dá)具有普遍性,既可能是早期癌變伴隨出現(xiàn)的生物學(xué)標(biāo)志,也可能是判斷結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的有用指標(biāo)。Kim等[4]認(rèn)為,在結(jié)腸癌進(jìn)展過(guò)程中,CD44基因的表達(dá)與突變的Kras基因相關(guān)聯(lián)，是被活化的Hras基因所誘導(dǎo),并認(rèn)為此種異常表達(dá)早于Kras和p53基因突變。因而認(rèn)為,CD44V6基因異常表達(dá)是腫瘤發(fā)生的早期事件。Yamao[5]等應(yīng)用RTPCR及Southern雜交技術(shù)檢測(cè)了25例結(jié)直腸癌患者及15例健康

4、對(duì)照者糞便中脫落細(xì)胞的CD44、CD44V6及CD44V10的表達(dá)。結(jié)果顯示結(jié)直腸癌患者的CD44V6及CD44V10的陽(yáng)性檢出率分別為68％和60％，術(shù)后的陰轉(zhuǎn)率分別為88.2％和80.0％。而且CD44V6及CD44V10均可在DuckesA期患者術(shù)前糞便中檢出。因而,對(duì)糞便中脫落細(xì)胞的CD44基因異常表達(dá)分析可作為非侵襲性方法用于結(jié)直腸癌患者的早期診斷及無(wú)癥狀高危人群的篩選。2p53p53基因位于人類17號(hào)染色體短臂(17p13.1)。全長(zhǎng)約1620kb。由11個(gè)外顯子和10個(gè)內(nèi)含子組成。p53基因在進(jìn)化過(guò)程中高度保守,外顯子2、

5、4、5、7、8分別編碼5個(gè)在進(jìn)化上高度保守的結(jié)構(gòu)。野生型p53(WT5p53)與調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)周期、調(diào)節(jié)細(xì)胞轉(zhuǎn)化、DNA復(fù)制、誘導(dǎo)細(xì)胞程序性死亡有關(guān)。有實(shí)驗(yàn)表明,分化良好的腺瘤,包括家族性多發(fā)性結(jié)腸息肉這一常染色體顯性遺傳病以及結(jié)直腸息肉中p53的表達(dá)明顯低于結(jié)直腸癌[6]。結(jié)直腸癌p53基因的缺失率為50％～70％[7～9]1996年，Eguchis等采用PCRSSCP技術(shù)對(duì)11例結(jié)直腸癌患者的糞便進(jìn)行檢查，7例中查到p53基因突變(64％)。綜上，p53基因的缺失或突變與結(jié)直腸癌的發(fā)生密切相關(guān)。3DCC結(jié)直腸癌缺失基因(Delet

6、edinColorectalCarcinoma,DCC)作為90年代發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制基因,其與結(jié)直腸癌的相關(guān)性研究正在不斷深入。Vogelstein[10]等報(bào)道,在結(jié)直腸黏膜上皮由正常轉(zhuǎn)化為上皮增生和腺瘤,并演進(jìn)到癌變的過(guò)程中,有47%的進(jìn)展期腺瘤(腺體或細(xì)胞呈中、重度不典型增生)和73%的結(jié)直腸癌細(xì)胞中可檢出染色體18q有LOH（DCC等位基因的雜合性丟失LossOfHeterozygosity,LOH）,但在早中期腺瘤(<1.0cm)很少見。而在90%的有18qLOH的病人中,缺失區(qū)包含了DCC基因位點(diǎn)[11,12]。Goi[

7、13]等用Westernblotting法檢測(cè)結(jié)腸癌、癌旁組織及腺瘤中的DCC蛋白表達(dá)情況,則發(fā)現(xiàn)癌組織中DCC蛋白明顯減少或缺失,在腺瘤組織中DCC蛋白有明顯表達(dá),與正常組織幾乎相同,提示DCC基因缺失或失活是結(jié)腸腺瘤向癌轉(zhuǎn)變的一個(gè)促發(fā)因素。DCC基因是目前發(fā)現(xiàn)的最長(zhǎng)的人腫瘤抑制基因,尤其在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中具有重要意義,其失活和表達(dá)異常與結(jié)直腸癌的診斷關(guān)系密切。但DCC基因的失活機(jī)制、DCC蛋白的功能及其誘導(dǎo)細(xì)胞分化的機(jī)制還有待于進(jìn)一步探索。4RasRas基因家族分為Kras、Hras、Nras,基因編碼蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量

8、均為21Ku，故稱為p21。Ras基因的突變?cè)诮Y(jié)直腸細(xì)胞癌變過(guò)程中起啟動(dòng)作用并是一個(gè)早期事件,突變產(chǎn)生具有致癌活性的p21蛋白,通過(guò)Ras信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,激活下游信號(hào)分子,持續(xù)刺激細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育、增殖,引起細(xì)