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《柑桔抗?jié)儾》肿訕?biāo)記篩選》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、摘要柑桔抗?jié)儾》肿訕?biāo)記篩選果樹學(xué)專業(yè)碩士研究生：彭祝春指導(dǎo)教師：陳善春研究員洪棋斌副研究員摘要柑桔潰瘍病(CitrusCanker)是嚴(yán)重危害世界柑桔產(chǎn)業(yè)的一種細(xì)菌性病害，病原為地毯草黃單胞桿菌柑桔致病變種[Xanthomonasaxonopodispv．Citri(Xac)】。該病能感染大多數(shù)栽培柑桔品種，導(dǎo)致落葉、落果、樹勢衰弱、果實生銹斑和品質(zhì)變劣，甚至樹體死亡。增加了生產(chǎn)成本、降低了商品價值。培育和利用抗?jié)儾〉母探燮贩N，是從根本上解決潰瘍病危害的有效而徹底的方法，但受到抗性機(jī)理研究不夠深入、常規(guī)育種
2、轉(zhuǎn)移抗性基因面臨多重困難，以及可利用外源抗性基因有限等因素的制約，目前柑桔抗?jié)儾∑贩N的培育，尤其是生產(chǎn)上大量栽培的甜橙、葡萄柚等敏感品種的改良仍進(jìn)展共微，迫切需要對潰瘍病抗性進(jìn)行深入研究。分子標(biāo)記技術(shù)為深入開展柑桔潰瘍病研究提供了一條途徑。本試驗采用抗柑桔潰瘍病的宜昌橙2586X易感病的嶺南沙田柚F1代為試材，開展抗?jié)儾》肿訕?biāo)記篩選。首先，隨機(jī)選取80株F1代材料，在疫區(qū)進(jìn)行潰瘍病田間接種鑒定，按標(biāo)準(zhǔn)5級抗性評價樣序分級評價；其次，為了與分子標(biāo)記評價結(jié)果進(jìn)行對照分析，將免疫和高抗類型作為抗性類型，中抗、中感
3、和感病作為敏感類型進(jìn)行簡化分析，并對該簡化分離結(jié)果進(jìn)行卡方檢驗。隨后，根據(jù)集合分離分析法BSA(BulkedSegregantAnalysis)，分別選取8個極端抗病單株和極端感病單株組建抗感基因池，通過SSR和S黜埋等分子標(biāo)記技術(shù)，建立適合柑桔的分子標(biāo)記體系，開展與該病抗性相關(guān)的分子標(biāo)記篩選。對基因池篩選獲得的差異引物組合，進(jìn)行親本和抗感池個體的進(jìn)一步鑒定，鑒定的標(biāo)記作為可能的抗性候選標(biāo)記，并將該候選標(biāo)記對鑒定的分離群體進(jìn)行進(jìn)一步驗證，將其結(jié)果與抗性鑒定結(jié)果進(jìn)行相關(guān)分析，采用最大似然法計算遺傳距離。最后，為了
4、更深入驗證所獲得的標(biāo)記，選用生產(chǎn)上比較公認(rèn)的潰瘍病抗感性類型材料，進(jìn)行擴(kuò)增檢測。通過上述研究，獲得以下主要研究結(jié)果：(1)田間抗性鑒定表明，宜昌橙2586X嶺南沙田柚的F1代材料抗性分離明顯，80株材料除2株死亡外。免疫(1)5株，高抗(胍)37株，中抗(腿)31株，中感(MS)3株和高感(S)2株。簡化為抗感2級分析，有42株抗病，36株感病。經(jīng)卡方檢驗，x2=o．16遠(yuǎn)小于妒o．05-3．84，抗感性狀分離符合1：1比例，表明此條件下該性狀的遺傳符合孟德爾規(guī)律。(2)建立比較穩(wěn)定且適于BSA法標(biāo)記篩選的柑桔
5、SSR和SRAP擴(kuò)增檢測體系，從285對SSR弓[物組合中篩選到26對在抗感基因池間表現(xiàn)多態(tài)性的引物，從360對S鼬謹(jǐn)引物組合中篩選至-IJ67對在抗感基因池間表現(xiàn)出多態(tài)性引物。西南大學(xué)碩士學(xué)位論文(3)通過基因池個體驗證，從26對SSR多態(tài)性引物組合中找到了一個可能與柑桔潰瘍病抗性相關(guān)基因連鎖的標(biāo)記，將其命名為CRl4．110。該標(biāo)記在8個抗病基因池單株和8個感病基因池單株及親本間表現(xiàn)與抗性相關(guān)的多態(tài)性。進(jìn)一步對測試分離群體進(jìn)行單株驗證，表現(xiàn)抗病的42個單株中，有3株未出現(xiàn)該特征片段：表現(xiàn)感病的36個單株中，
6、有6株出現(xiàn)該特征片段。經(jīng)CORREL函數(shù)相關(guān)分析，該標(biāo)記與柑桔潰瘍病抗性的相關(guān)系數(shù)為0．79，采用最大似然法計算重組率為(9．38±3．5％)，通過Kosambi函數(shù)將其轉(zhuǎn)換成圖距單位(cM)，遺傳距離為9．11cM。(4)通過有代表性的柑桔及其近緣屬種類驗證表明，在公認(rèn)感病的甜橙、柚、枳及其雜種中沒有CRl4．110標(biāo)記：抗病的宜昌橙、寬皮柑桔、金柑、香橙的多數(shù)材料出現(xiàn)此標(biāo)記。關(guān)鍵詞：柑桔潰瘍病抗性鑒定集合分離分析法(BSA)分子標(biāo)記篩選：IIAbstractScreeningofMolecularMarke
7、rputativelyrelatedwithCitrusCankerResistanceMastercandidate：PengzhuchunSupervisor：Prof．ChenshanchunAssociateProf．HongqibinAbstractCitruscankerisadiseasecausedbythebacteriumXanthomonasaxonopodispv．citri．Itcaninfectthemajorcitruscultivarscommerciallycultivated
8、．Thediseasemightleadtodefoliation，diebackandfruitdropandinfectedfruitsthatremainarelessvaluableorentirelyunmarketable．Itwillincreasetheproducingcostofcitrusfruitsandtriggerquarantines．Breedingan
