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《大鼠間充質干細胞磁標記與肝臟移植后的mr活體示蹤》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、華中科技大學同濟醫(yī)學院2003級博士學位論文前言干細胞具有無限增殖及多向分化等潛能，通過干細胞移植可以使其增殖、替代病損細胞，從而達到修復器官解剖和功能的目的。近年來，隨著干細胞研究的不斷深入，干細胞移植已經在多種疾病的治療中顯示出巨大的潛力和廣闊的應用前景。在干細胞移植的研究中，標記及示蹤技術一直是研究熱點之一。對干細胞移植的示蹤有助于了解供體細胞在受體內的分布、遷徙、分化及轉歸等生物學行為，這對評估干細胞移植的效果以及提供干細胞移植療法的最優(yōu)化信息具有重要意義。傳統(tǒng)的干細胞示蹤多采用以下方法：①基因標記：即通過改變細胞的遺傳基因，使之表達特異性蛋白標志物，如綠色熒光
2、蛋白(GFP)基因可表達GFP，LacZ基因可表達B．半乳糖苷酶等。②核酸標記：在細胞有絲分裂過程中將某種物質合成于DNA鏈內，如3H胸腺嘧啶(3H—Tdr)、5一溴脫氧尿營(BrdU)等。③熒光染料標記：如聯脒二苯吲哚(DAPI)、碳花青(DiD等。④利用染色體或其它特異性酶、抗原等作標志物：如采用雄性(或二肽基肽酶IV+)供體細胞移植入雌性(或二肽基肽酶IV一)受體，通過組化方法檢測。上述標記及示蹤方法存在一個共同的缺陷，即只能在離體狀態(tài)下通過組織病理學分析來實現，這顯然不符合干細胞移植未來臨床應用的需要。隨著干細胞研究的不斷進展，建立一種無創(chuàng)、有效的活體示蹤技術已
3、經勢在必行，而分子影像學的發(fā)展為解決這一問題提供了可能。分子影像學是將活體動物及人類復雜的生理病理過程在細胞或分子水平上變成直觀的圖像，從而向我們提供傳統(tǒng)影像學無法得到的細胞或分子水平的信息。根據成像方法不同，分子影像學主要包括核素分子成像(PET)、MR分子成像、光學分子成像等，其中，MR因其較高的空間分辨率而在干細胞活體示蹤的研究中備受矚目。有關干細胞磁標記及MR活體示蹤的研究，國內外部分學者已進行了有益的嘗試并取得初步成功。早期研究多采用高場強MR系統(tǒng)進行單個細胞成像，近年華中科技大學同濟醫(yī)學院2003級博士學位論文來，隨著標記方法的不斷改進和標記效率的明顯提高，
4、也有研究應用1．5TMR成功地進行了磁標記干細胞的體外成像及活體示蹤。磁標記干細胞的MR活體示蹤研究目前多局限于中樞神經系統(tǒng)和心臟等領域。無論在心臟，還是大腦和脊髓，研究者均發(fā)現了磁標記干細胞移植部位MR信號的改變，并顯示了信號改變區(qū)域與病理檢測結果的一致性。這些研究多采用局部點注射方式將磁標記干細胞移植入實體組織，使干細胞得以在組織局部形成較高的濃度。然而，在干細胞移植的實際應用中，點注射移植方式只能用于某些局部病變的治療，對于彌漫性或系統(tǒng)性病變，干細胞治療以血管注射方式移植似乎更為合理。經血管注射移植后，磁標記干細胞在組織器官內呈彌散分布，且有隨血流遷移至靶器官以外
5、的可能，此種情況下MR示蹤方式及其效果如何?這正是干細胞移植MR活體示蹤研究中急需解決的問題，也是目前該領域的研究熱點之一。干細胞移植對終末期肝病的治療作用已在許多動物試驗中證實，而且干細胞還具有作為基因載體用于肝癌或某些先天性遺傳性肝病基因治療的潛力。隨著肝臟干細胞移植研究的不斷進展，利用MR進行肝臟干細胞移植的活體示蹤也就越發(fā)必要和迫切。本課題擬采用超順磁性氧化鐵納米微粒標記大鼠骨髓間充質干細胞(肝臟干細胞的來源之一)，并通過制作大鼠急性肝損傷模型，將磁標記干細胞經門靜脈途徑植入大鼠肝內，利用1．5T臨床應用型MR成像系統(tǒng)進行磁標記干細胞移植后的動態(tài)MR成像及相關病
6、理學檢測，觀察細胞植入前后Mm信號有無變化及變化規(guī)律，并與病理結果對照，探討MR活體顯示磁標記干細胞的可行性，從而為肝臟干細胞移植提供一種無創(chuàng)、有效的活體示蹤技術。華中科技大學同濟醫(yī)學院2003級博士學位論文大鼠間充質干細胞磁標記及肝臟移植后的MR活體示蹤華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬協(xié)和醫(yī)院放射科博士研究生：蔡金華導師：馮敢生教授摘要第一部分大鼠間充質干細胞的分離、培養(yǎng)及生物學特性目的建立大鼠骨髓間充質干細胞(MSCs)分離及體外擴增的方法，并了解其生物學特性，為應用MSCs進行進一步研究奠定基礎。方法取Wistar大鼠雙側股骨及脛骨，沖洗骨髓腔獲得骨髓全系細胞，離心后重
7、懸于含10％胎牛血清的5m1D肛M／F12培養(yǎng)基，置37。C、5％CO。飽合濕度培養(yǎng)箱中，利用貼壁法培養(yǎng)、純化MSCs。接種后第3d全量換液，以后每2d換液1次，至貼壁細胞逐漸鋪滿瓶底時，傳代擴增。倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)。分別取生長良好的P。、P。、P5代細胞繪制生長曲線，并進行貼壁率的檢測。方差分析檢驗三代細胞生長性狀及貼壁特性差異。結果(1)原代細胞生長較慢，以克隆集落方式增殖，培養(yǎng)早期細胞表現為短梭形、三角形或星形等多種形態(tài)。之后，細胞集落逐漸融合，細胞形態(tài)也漸趨均一，呈長梭形或纖維狀。至第12～14d，細胞已基本融合，形態(tài)均一，
