prrsv+ade途徑感染對(duì)豬肺泡巨噬細(xì)胞tnfα的表達(dá)調(diào)控

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1、PRRSVADE途徑感染對(duì)豬肺泡巨噬細(xì)胞TNF噸的表達(dá)調(diào)控研究生：馮麗麗導(dǎo)師：張改平研究員中文摘要豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)可引起母豬繁殖障礙、仔豬呼吸道疾病。PRRSV在世界范圍內(nèi)流行，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損火?？贵w依賴(lài)的感染增強(qiáng)作用(ADE)是PRRSV的一個(gè)重要免疫學(xué)特征，同時(shí)也是PRRS防控中遇到的最大難題之一。PRRSV具有嚴(yán)格的細(xì)胞專(zhuān)嗜性，主要通過(guò)受體介導(dǎo)的胞吞作用感染豬肺泡巨噬細(xì)胞(PAM)。TNF．a(chǎn)主要是由巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的一種具有促炎活性和免疫調(diào)節(jié)作剛的單核岡子。核轉(zhuǎn)錄因子(NF．1cB)，作

2、為信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的樞紐，能夠調(diào)節(jié)TNF．a(chǎn)等基因表達(dá)。NF．r,B活化時(shí)，從胞漿易位到胞核，DNA結(jié)合活性提高，上調(diào)TNF．a(chǎn)等目標(biāo)基岡的轉(zhuǎn)錄。IKKp是I．1(B激酶的主要活性單位，參與NF．r．B的活化過(guò)程。本研究用PRRSVBJ．4株經(jīng)ADE途徑體外感染PAM，分析了TNF．a(chǎn)、NF．r,B及l(fā)KKp的表達(dá)變化，探索PRRSV感染對(duì)豬肺泡巨噬細(xì)胞TNF．?！谋磉_(dá)調(diào)控。分離培養(yǎng)PAM，采用標(biāo)準(zhǔn)的ADE測(cè)定方法確定PRRSVBJ．4株產(chǎn)生ADE的條件。用104TCID50的PRRSV與等體積的10倍稀釋后再以

3、2的指數(shù)倍(2d～2{)稀釋的陽(yáng)性血清的混合物接種PAM，48h后收獲病毒，用Marc．145細(xì)胞測(cè)定子代病毒活性。結(jié)果表明，l：320稀釋的抗PRRSV抗體能顯著增強(qiáng)PRRSVBJ．4株的繁殖(p

4、RGreen．I熒光定量PCR，Ct值與標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對(duì)數(shù)之間存在良好的線(xiàn)性關(guān)系，建立了TNF．a(chǎn)及NF．rB、IKKB的SYBRGreen-I熒光定量PCR檢測(cè)方法。BJ．4株分別經(jīng)ADE途徑和正常途徑感染豬肺泡巨噬細(xì)胞，24h后收集細(xì)胞和培養(yǎng)上清。利用SYBRGreen．I熒光定量PCR檢測(cè)TNF．a(chǎn)、NF—r,B和IKKD的mRNA表達(dá)變化。同時(shí)，采用定量ELISA檢測(cè)豬肺泡巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNF一僅的蛋白濃度。試驗(yàn)結(jié)果表明，PRRSV經(jīng)ADE途徑感染的豬肺泡巨噬細(xì)胞TNF．a(chǎn)表達(dá)下調(diào)，NF．r,B和IKK

5、p也同時(shí)表達(dá)卜．調(diào)。對(duì)PAM培養(yǎng)上清中TNF．a(chǎn)的蛋白檢測(cè)結(jié)果表明，TNF．a(chǎn)的蛋白表達(dá)變化與mRNA的表達(dá)變化基本一致。關(guān)鍵詞：豬繁殖與呼吸綜合征病毒；抗體依賴(lài)增強(qiáng)作用；TNF．a(chǎn)；表達(dá)變化；熒光定量PCREffectonTNF．0【ExpressionofPorcinePulmonaryAlveolarMacrophageswithPRRSVADEInfectionMaster：LiliFengSupervisor：GaipingZhangABSTRACTPorcinereproductiveandrespi

6、ratorysyndromevirus(PRRSV)WascharacterizedbyreproductivefailureinSOWSandgiltsandrespiratorydiseasesinpiglets．PRRSVisendemicintheworld’Slargestporkproducingnationsandaccountsformassiveglobaleconomiclosseseachyear．Antibody-dependentenhancementofinfection(ADE)is

7、oneofthemostimportantimmunologicalfactors．a(chǎn)ndisalsooneofthemajorproblemsinpreventingandcontrollingPRRS．PRRSVisknownforitsrestrictedcelltropism，primarilyinfectingporcinealveolarmacrophages(PAM)viareceptor-mediatedendocytosis．TNF-0【，producedmostlybymacrophages，

8、isakindofmonokines．Itsmainfunctionsareinflammatorypromotionandimmunologicalregulation．Nuclearfactor-r,BfNF-KB)，asthecenterofcellsignaltransduction，isacriticalregulatorofinnateandadaptivei