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《中華蜜蜂apidaecin基因在乳酸乳球菌中融合表達》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、中山大學碩士學位論文中華蜜蜂apidaecin基因在乳酸乳球菌中的融合表達專業(yè):動物學碩士生:黃玉明指導老師:張文慶教授摘要apidaecin是一種從蜜蜂的淋巴液中分離到的多肽抗生素。主要對革蘭陰氏性菌,尤其是人類腸桿菌科致病菌,具有很強的殺傷力,而對真核細胞沒有毒性作用。因此,apidaeein在醫(yī)藥和食品工業(yè)中有著廣闊的應用前景。泛素可以以分子內伴侶形式起到促進翻譯和增加產物穩(wěn)定性的作用,而且表達的融合蛋白在離體或體內條件下,經泛素特異性蛋白酶在泛素分子C一末端切割后,可以釋放出完整而有活性的外源蛋白。這項被稱為泛素融合的技術(ubiqu“m,fIlsiontechnology)
2、已開始應用于多種外源基因的表達及轉基因植物研究領域。本研究設計一對簡并引物,從中華蜜蜂(Apisceranacerana)中克隆了泛素基因的編碼區(qū)。序列分析表明,該編碼區(qū)的長度為228bp,編碼的多肽由76個氨基酸殘基組成,相對分子質量為8.57kDa,其等電點為6.79,同源性比較發(fā)現,中華蜜蜂泛素基因與其他真核生物泛素基因在氨基酸水平上具有96%以上的相似性。根據乳酸乳球菌的密碼子偏嗜性,對原來的apidaecin基因進行了‘改造,以泛素(ubiquitin)融合蛋白的形式在乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)MGl363中表達了apidaeein。利用SDS—PAG
3、E在重組后的宿主苗中檢測到特異蛋白帶。ubiquitin-apidaecin融合蛋白不具備活性,為了能夠去除泛素,得到有活性的apidaecin,從釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)中克隆一種泛素特異性蛋白酶YUHl,序列分析表明與GenBank中泛素特異性蛋白酶(YUI-11)基因的序列黃玉明中華蜜蜂apidaecin基因在乳酸乳球菌中的融臺表達完全一致??寺〉降姆核靥禺愋缘鞍酌竃UHl與乳酸乳球菌表達載體pMG36e連接構建表達載體,計劃在乳酸乳球菌(Llactis)MGl363中表達,為獲得有活性的apidaecin,進行了初步的探索。關鍵詞:抗菌肽,a
4、pidaecin,泛素,乳酸乳球菌,融合表達,泛素特異性蛋白酶Ⅱ!當查蘭堡主蘭堡絲莖FusionExpressionofApisceranaapidaecinGeneinLactococcuslact/sMajor:ZoologyName:HuangYu—mingSupervisor:ProfessorZhangWen-qingAbstractApidaecin,apeptideantibioticwhichisisolatedfromlymphfluidofthehoneybee,hasstrongantibacterialactivitiesagainstGramnegative
5、bacteriabuthasnotoxicityoneukaryoticcells.Sothepeptidehaspromisingpossibleapplicationsinmedicineandfoodindustry.tyoiquitinappearstoreducevariabilityinexpressionyieldsandenhancesolubility,probablybecausetheyactascovalentlylinkedchaperonesandenhancethefoldingofthefusedprotein.Thebioactiveextrinsi
6、cproteincanbereleasedbyubiquitin-specificproteasesthatspecificallycleavetheisopeptidebondattheC-terminusofnhiquitin,invitroorvivo.Thisubiquitin一血siontechnologyhasbeendevelopedfortheexpressionofheterologousgenesandtheresearchontransgeneplant.InthisresearcIl’thecodingsequenceof卻缸ceranaceranaubiqu
7、itingeneWasisolated.ThelengthofhisORFis228bp,encodingaproteinwithMrof8.57kDaandisoelectricpointof6,79,MultiplesequencealignmentindicatedthatA.ceranaceranaubiquitinisverysimilartothehomologousproteinsofothereukaryoticspeciesanditha