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《wnt信號通路參及中腦多巴胺神經(jīng)元損傷地研究 (1)》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、萬方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄中文摘要??????????????????????????‘1英文摘要??·?·一??????????????????????3第一部分前言???????????????????????“5材料與方法????·???-?????????????????6結(jié)果????????????????????????????9討論????????????????????????????15第二部分前言???????????????????????‘17材料與方法????????????????????????一18結(jié)果??????????????????????
2、??????23參考文獻(xiàn)??????????????????????????35致謝????????????????????????????·40綜述ERK傳導(dǎo)通路神經(jīng)生物學(xué)進(jìn)展????????????”41參考文獻(xiàn)??????????????????????????45獨創(chuàng)性聲明????????????????????????一49萬方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文wnt信號通路參與中腦多巴胺神經(jīng)元損傷的研究中文摘要經(jīng)典Wnt信號通路在中腦多巴胺神經(jīng)元發(fā)育的過程中至關(guān)重要，一些研究提示這條通路可能與帕金森病(Parkinson’disease，PD)發(fā)病相關(guān)，但都一致缺乏基因敲除小鼠的證
3、據(jù)。Wnt信號通路中重要的分子包括低密度脂蛋白5(LRP5)、低密度脂蛋白6(LRP6)、13-catenin。LRP5／6是Wnt信號通路中共受體，能分別與Wnt．fzd形成三聚物。13-catenin是調(diào)控wnt信號通路的重要分子，有研究發(fā)現(xiàn)13-catenin在中腦DA神經(jīng)元發(fā)育中不可或缺。本實驗采用cre．10xp策略制備DA神經(jīng)元內(nèi)選擇性敲除LRP5，LRP6和13-catenin的條件性基因敲除(CKO)小鼠。首先，通過地高辛標(biāo)記的13-catenin原位雜交探針，檢測了13-cateninmRNA在黑質(zhì)區(qū)域的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，13-cateninmRNA陽性細(xì)胞在對照組正
4、常小鼠中腦黑質(zhì)致密帶(SNc)處有表達(dá)。而13-cateninCKO小鼠該區(qū)域的原位雜交信號明顯下降。因此，原位雜交表明13-cateninCKO小鼠的中腦黑質(zhì)內(nèi)15-catenin明顯下降，一些殘存的信號可以是非多巴胺神經(jīng)表達(dá)的[3-catenin。由于LRP5mRNA和LRP6mRNA原位雜交信號廣泛分布，信號較弱。因此我們采用免疫組化方法對敲除效率進(jìn)行驗證。市售的抗體同時識別LRP5和LRP6，因此對三組小鼠(LRP5CK0，LRP6CKO和U心5／LRP6雙重CKO)進(jìn)行了驗證。正常對照組小鼠黑質(zhì)LRP5／LRP6陽性信號強，大量與TH陽性細(xì)胞共標(biāo)。LRP5／LRP6雙重CKO小
5、鼠黑質(zhì)處LRP5／LRP6無陽性表達(dá)，與黑質(zhì)TH陽性細(xì)胞不共標(biāo)。與正常組小鼠相比，LRP5CKO與LRP6CKO小鼠LRP5／LRP6陽性信號減弱，與TH陽性細(xì)胞共標(biāo)的細(xì)胞減少。本結(jié)果間接證明LRP5CKO和LRP6CKO黑質(zhì)內(nèi)上述基因被敲除。驗證LRP5，LRP6和13-catenin成功敲除后，再通過免疫組織化學(xué)方法觀察這三種CKO小鼠，成年時期中腦黑質(zhì)內(nèi)酪氨酸羥化酶(Tyrosinehydroxylase．TH)免疫反應(yīng)陽性數(shù)量是否發(fā)生改變。發(fā)現(xiàn)LRP5，LRP6缺失后小鼠中腦DA神經(jīng)元的數(shù)量沒有改變，而13-catenin敲除的小鼠中腦DA神經(jīng)元的數(shù)量下降，由此驗證lB-cate
6、nin參與DA神經(jīng)元發(fā)育的觀點。繼而在這些小鼠上進(jìn)行PD發(fā)病的環(huán)境損害因素的測試，采用的方法是腹腔注射神經(jīng)毒素1．甲基-4苯基．1，2，3，6．四氫吡啶(MPTP)15mg／kg，每日一次，持續(xù)注射5周后，正常小鼠組、LRP5CKO小鼠組和LRP6CKO小鼠組黑質(zhì)TH．陽性神經(jīng)元數(shù)量均降低。但是LRP5和LRP6CKO小鼠TH陽性細(xì)胞下降的程度低于MPTP處理的正常對照小鼠。此結(jié)果提示在中腦DA神經(jīng)元中特定敲除LRP5和LRP6在一定程度上保護(hù)了DA神經(jīng)元抵抗神經(jīng)毒MPTP的損害。另外，雖然13-cateninCKO小鼠黑萬方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文質(zhì)DA神經(jīng)元的數(shù)量在生理鹽水處理時
7、就比較少，但是經(jīng)MPTP處理后13-cateninCKO小鼠黑質(zhì)DA神經(jīng)的數(shù)量卻與正常小鼠相當(dāng)。表明13-catenin缺失時和LRP5／6CKO小鼠一樣DA神經(jīng)元對MPTP毒素有抵抗作用。以上結(jié)果提示W(wǎng)nt信號通路缺失可能在MPTP引起的中腦DA神經(jīng)元損傷中具有一定的保護(hù)作用，有助于深入認(rèn)識多巴胺神經(jīng)元損傷的生物學(xué)機制。關(guān)鍵詞：低密度脂蛋白5；低密度脂蛋白6；13-catenim1一甲基一4苯基一1，2，3，6一四氫吡啶；多巴胺神
