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《感染性豬圓環(huán)病毒2型基因組dna的分子克隆》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、維普資訊http://www.cqvip.com第l8卷4期中國病毒學(xué)18(4)：371—3752003年8月VIR0L0GICASINIGAAugust2003感染性豬圓環(huán)病毒2型基因組DNA的分子克隆蘆銀華，華修國2，崔立2，談國蕾，許立華1,3，黃偉堅，陳德勝，陳溥言(1．南京農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)部動物疫病診斷與免疫重點開放實驗室．江蘇南京，210095；2．上海交通大學(xué)農(nóng)學(xué)院，上海，200030；3．寧夏學(xué)農(nóng)學(xué)院動物科學(xué)系，寧夏銀川，750105)MolecularCloningoftheInfectiousGenomi
2、cDNAofPorcinecircovirusType2LUYin—hua，HUAXiu—guo，CUILi，TANGuo—lei，XULi—hua’，HUANGWei-jian，CHENDe．sheng．CHENPu—yanrJ．KeylaboratoryofAnimalDiseaseDiagnosticandImmunology,MinistryofAgriculture，NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing210095，China；2．Colle·．PofAgriculture
3、，ShanghaiJiaotongUniversity,Shanghai200030，China；3．AnimalScienceDepartmentofAgriculturalCollege。NingxiaUniversity,Hnchuan750105，China；)Abstract：Thecompletegenomeoftype2Porcinecircovirus(pcv一2)wasamplifiedbypolymerasechainreaction(PCR、andcloneddirectlyintomeEcoRIs
4、itesofplasmidpcDNA3，andrecominantplasmidcarryingthecompletegenomewasconstructed，designatedpcDNApcv2．TheentiregenomeofPCV一2waspurifiedandrecycledfrompcDNApcv2withthedigestionofEcoRIenzymeandthencirculargenomicDNAwasgeneratedbyself-ligatingwithT4DNAligaseinvitro．Th
5、enon—infectedPK一15cellsweretransfectedwiththePCV一2circulargenomeusingLipofectinReagent．Afterfourcontinuouspassages，PCV一2virusandspecificantigenswerevisualizedbyelectronmicroscopyandIFA，respectively．Thus，theclonedcircularPCV一2genomicDNAgeneratedinthisstudywasinfec
6、tiousfnvitro．Keywords：Porcinecircovirustype2；Completegenome；Transfection摘要：本研究通過PCR擴增出豬圓環(huán)病毒2型(PCV一2)的全基因組(1768bp)，克隆入pcDNA3載體的EcoRI酶切應(yīng)點，獲得含有PCV．2全基因組的重組質(zhì)粒，命名為pcDNApcv2。將重組質(zhì)粒大量擴增后，用EcoRI切出l768bp的PCV一2全基因組，在體外用T4DNA連接酶使其連接環(huán)化。用脂質(zhì)體法將體外連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)染無PCV污染的PK一15細胞，經(jīng)4次連續(xù)傳代，用間接
7、免疫熒光實驗(IFA)及電鏡觀察證實已獲得復(fù)制能力的PCV一2病毒。由此可見，本試驗構(gòu)建的環(huán)化的PCV．2全基因組DNA具有感染性。關(guān)鍵詞：豬圓環(huán)病毒2型；基因組；轉(zhuǎn)染中國分類號：$852．65文獻標(biāo)識碼：A文章編號：1003—5125(2003)04-037l一05根據(jù)基因組成及致病性不同，豬圓環(huán)病毒因組為獨特的單鏈負股環(huán)狀DNA結(jié)構(gòu)，在宿主細(Porcinecircovirus。PCV)分兩種血清型，即PCV1胞內(nèi)的復(fù)制模式可能類似于大腸干菌入噬菌體的和PCV．2。PCV1無致病性，基因組全長1．759kb。滾環(huán)式復(fù)
8、制。軟件分析表明，PCV基因組可能包PCV．2基因組為1．768kb，可致斷奶仔豬多系統(tǒng)消括11個開放閱讀框(ORF)。其中ORF1及ORF2耗綜合癥(PMwS)，主要影響6．8周齡斷奶仔豬，的功能研究得較為清楚，ORF1編碼與病毒復(fù)制相以呼吸困難、消瘦及免疫抑制為特征Il。PCV基關(guān)的Rep蛋白，ORF2編碼病毒的
