gpc3在肝細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移及侵襲中作用及機(jī)制的研究

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1、博士學(xué)位論文GPC3在肝細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移及侵襲中的作用及機(jī)制研究研究生：阮健導(dǎo)師：羅榮城教授，楊洋教授摘要肝細(xì)胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是世界上最常見的惡性腫瘤之一，以亞洲和非洲高發(fā)。近些年西方發(fā)達(dá)國家的HCC發(fā)病率也呈上升趨勢，尤其是美國和加拿大Ⅲ砼1。我國是世界上HCC高發(fā)地區(qū)之一，每年發(fā)病人數(shù)約為30萬人，位于常見腫瘤的第3位。此外，我國肝癌的年死亡率為20．40／10萬，其中城市為19．98／10萬，農(nóng)村為23．59／10萬，分別居惡性腫瘤死亡率的第二位和第一位【3，41。手術(shù)切除仍然是治愈早期肝

2、癌的最佳選擇，然而，即使是根治性切除之后，60％．70％的患者在術(shù)后5年內(nèi)會發(fā)生轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)【5，6J。盡管一些臨床因素(如腫瘤分化程度、腫瘤大小、是否脈管侵潤等)與患者預(yù)后密切相關(guān)，但是HCC的發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制目前仍不明確，因此，探索肝癌的發(fā)病基礎(chǔ)及轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的相關(guān)因素，尋找肝癌早期診斷、預(yù)測轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的生物指標(biāo)和靶向治療的靶點(diǎn)，是目前腫瘤學(xué)研究的迫切任務(wù)之一。硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPGs)是一類攜帶一條或多條硫酸乙酰肝素鏈的蛋白【71。這些肝素鏈?zhǔn)怯砷L線狀的葡糖醛酸聚合物／N．乙酰氨基葡糖重復(fù)雙糖單位組成。鏈的長度高度均可變，大部

3、分雙糖單位都受N一去乙?；⑷チ蛩峄?、差向異構(gòu)化和O．去硫酸化的調(diào)節(jié)。去乙?；T導(dǎo)了硫酸乙酰肝素鏈產(chǎn)生高強(qiáng)度的負(fù)電荷，從而允許硫酸乙酰肝素糖蛋白以較為雜亂的方式與帶有正電荷區(qū)域的蛋白產(chǎn)生相互作用，其中包括了一些所謂的“肝素結(jié)合生長因子”，如成纖維細(xì)胞生長因子(FGFs)，Wnt，Hedgehogs(Hhs)和骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMPs)18，9J。磷脂酰肌醇蛋白聚糖(GPC)是硫酸乙酰肝素糖蛋白家族中的一員，它的成員通中文摘要過磷脂酰肌醇錨(GPI)連接于細(xì)胞表面。哺乳動物的基因組包括了GPC家族的六個成員：(GPCI至GPC6)，還有

4、其他兩個成員在果蠅中發(fā)現(xiàn)(dally和dip)00，1l】oGPC3基因定位于人染色體Xq26．1區(qū)，編碼的GPC3蛋白的相對分子質(zhì)量約為70Kda，由580個氨基酸組成。GPC3的核心蛋白由兩個部分組成，分別40kDa的GPC3氨基端(N．)片段及30kDa的GPC3羧基端(C．)片段【12，131。1996年，Pilia等首先報道了GPC3基因突變和功能缺失的患者出現(xiàn)了過度生長綜合征(SGBS)，這是一種X連鎖異常的疾病，主要表現(xiàn)為產(chǎn)前、產(chǎn)后胎兒的過度生長，并伴有廣泛的內(nèi)臟和骨骼的異常，同時還會增加胚胎源性腫瘤發(fā)生的可能性【l引。

5、隨后的研究又表明，GPC3的突變會導(dǎo)致細(xì)胞凋亡和細(xì)胞增殖的比例失調(diào)，而這可能是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要原因之一【15，161。GPC3還可與肝素結(jié)合型蛋白相結(jié)合，如基質(zhì)成分、細(xì)胞粘附分子、酶和酶抑制物、生長因子等，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、增殖、粘附和遷移等生理過程等，除此之外，其還可能參與調(diào)節(jié)一部分中胚層組織和器官發(fā)育的過程【l71。隨后有大量的研究報道表明GPC3在肝細(xì)胞癌、惡性黑色素瘤、Wilm’S瘤、大腸癌、肝胚細(xì)胞瘤和成神經(jīng)細(xì)胞瘤高表達(dá)，而在間皮瘤、乳腺癌、肺腺癌以及卵巢癌中表達(dá)顯著下調(diào)，提示GPC3在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用【18

6、'191。本課題組前期已完成以下的研究工作：應(yīng)用免疫組化及組織芯片技術(shù)，通過檢測36例原發(fā)性肝細(xì)胞癌組織和33例原發(fā)性肝癌癌旁組織以及一些其他常見腫瘤組織和其癌旁組織中GPC3蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果表明：(1)36例原發(fā)性肝細(xì)胞癌組織及33例原發(fā)性肝細(xì)胞癌癌旁組織中GPC3蛋白的表達(dá)率分別為66．17％(24／36)，3．0％(1／33)，兩者之間差異有顯著性；(2)GPC3蛋白在原發(fā)性肝細(xì)胞癌、肺鱗癌、癌旁慢性淺表性胃炎組織中表達(dá)，而乳腺癌、胃癌、胰腺癌、卵巢癌、宮頸癌、膽管細(xì)胞癌組織中無表達(dá)；(3)原發(fā)性肝細(xì)胞癌組織中GPC3蛋白表

7、達(dá)與患者性別、年齡、病理分級無顯著相關(guān)性。隨后我們收集和分析了61例原發(fā)性肝細(xì)胞癌患(HCC)者術(shù)后標(biāo)本切片，比較GPC3高表達(dá)博士學(xué)位論文患者與GPC3低表達(dá)患者之間的生存時間差異。結(jié)果表明，GPC3的表達(dá)與接受手術(shù)患者的轉(zhuǎn)移／復(fù)發(fā)高度相關(guān)，GPC3高表達(dá)的術(shù)后患者發(fā)生轉(zhuǎn)移或者復(fù)發(fā)的風(fēng)險是低表達(dá)患者的3．214倍。生存分析顯示GPC3高表達(dá)的肝癌患者預(yù)后顯著差于低表達(dá)者。此外，多變量分析提示GPC3在HCC中是一個獨(dú)立的預(yù)后預(yù)測參數(shù)120]。同時，我們還采用了酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(EnzymeLinkedImmunosorbentAss

8、ay)法分別檢查HCC30例，其他肝臟源性腫瘤8例，其他肝臟疾病(如肝炎、肝硬化、肝良性腫瘤)13例，以及25例正常人血清標(biāo)本中GPC3及甲胎蛋白的表達(dá)。結(jié)果顯示，血清GPC3蛋白水平診斷原發(fā)性肝細(xì)胞癌的敏感性和特異性分