物質(zhì)鑒定實(shí)驗(yàn)及改進(jìn)

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1、【實(shí)驗(yàn)】生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定（附實(shí)驗(yàn)改進(jìn)）斐林試劑鑒定可溶性還原糖　斐林試劑由質(zhì)量濃度為0.1g/mL的氫氧化鈉溶液和質(zhì)量濃度為0.05g/mL的硫酸銅溶液配制而成,二者混合后,立即生成淡藍(lán)色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2與加入的葡萄糖在加熱的條件下,能夠生成磚紅色的Cu2O沉淀,而葡萄糖本身氧化成葡萄糖酸。本實(shí)驗(yàn)中，用斐林試劑只能檢驗(yàn)生物組織中還原糖存在與否，而不能鑒定非還原性糖。現(xiàn)象：溶液的顏色變化過程為:淺藍(lán)色棕色磚紅色(沉淀)?！”緦?shí)驗(yàn)最理想的實(shí)驗(yàn)材料是含糖量較高的生物組織(或器官),而且組織的顏色較淺,或近于白色的,

2、如蘋果和梨的果實(shí)。斐林試劑的配制：甲液—質(zhì)量濃度為0.1g/mL的氫氧化鈉溶液；乙液—質(zhì)量濃度為0.05g/mL的硫酸銅溶液使用時(shí)臨時(shí)配制,將4～5滴乙液滴入2mL甲液中,配完后立即使用用于鑒定脂肪的實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備：實(shí)驗(yàn)材料最好選擇富含脂肪的種子,如花生種子(取其子葉)。供實(shí)驗(yàn)用的花生種子,必須提前浸泡3～4h。浸泡時(shí)間短了,不容易切成片浸泡時(shí)間過長,則組織太軟,切下的薄片不易成形。現(xiàn)象：蘇丹Ⅲ染液遇脂肪的顏色反應(yīng)為橘黃色,蘇丹Ⅳ染液遇脂肪的顏色反應(yīng)為紅色。因蘇丹Ⅳ染液與脂肪的親和力比較強(qiáng),所以,染色的時(shí)間應(yīng)比較短,一般為1min左右。蛋白質(zhì)的鑒定原

3、理：鑒定生物組織中是否含有蛋白質(zhì)時(shí),常用雙縮脲法,使用的是雙縮脲試劑。雙縮脲試劑的成分是質(zhì)量濃度為0.1g/mL的氫氧化鈉溶液和質(zhì)量濃度為0.01g/mL的硫酸銅溶液。蛋白質(zhì)可與雙縮脲試劑發(fā)生紫色反應(yīng)。用于鑒定蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備：實(shí)驗(yàn)材料最好選用富含蛋白質(zhì)的生物組織(或器官),如大豆,雞蛋清。如用大豆,必須提前浸泡1～2d,這樣容易研磨成漿（也可用現(xiàn)成的豆?jié){）。如用雞蛋清，要先稀釋。雙縮脲試劑的配制：取10g氫氧化鈉放入量筒中,加水至100mL,待充分溶解后倒入試劑瓶中,配成質(zhì)量濃度為0.1g/mL的氫氧化鈉溶液,瓶口塞上膠塞,貼上標(biāo)簽,寫上試劑

4、A。取1g硫酸銅放入量筒中,加水至100mL,待充分溶解后倒入試劑瓶中,配成質(zhì)量濃度為0.01g/mL的硫酸銅溶液(藍(lán)色)。瓶口塞上膠塞,貼上標(biāo)簽,寫上試劑B。注意：（1）關(guān)于鑒定還原糖的實(shí)驗(yàn)，在加熱試管中的溶液時(shí)，應(yīng)該用試管夾夾住試管上部，并放入盛開水的大燒杯中加熱。注意試管底部不要接觸燒杯底部，同時(shí)試管口不要朝向?qū)嶒?yàn)者，以免試管內(nèi)溶液沸騰時(shí)沖出試管，造成燙傷。如果試管內(nèi)溶液過于沸騰，可以上提試管夾，使試管底部離開大燒杯中的開水。（2）做鑒定還原糖和蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)時(shí)，在鑒定之前，可以留出一部分樣液，以便與鑒定后的樣液的顏色變化作對比，這樣可以增強(qiáng)說

5、服力。（3）斐林試劑的甲液和乙液混合均勻后方可使用，切勿將甲液和乙液分別加入組織樣液中檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)的改進(jìn)長沙市第十六中學(xué)王揚(yáng)利檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)，是高中老教材中的第一個(gè)實(shí)驗(yàn)，也是新教材中的第二個(gè)實(shí)驗(yàn)。初中實(shí)驗(yàn)以形態(tài)解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)為主，高中實(shí)驗(yàn)以生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)為主，這個(gè)實(shí)驗(yàn)實(shí)現(xiàn)了這種內(nèi)容的轉(zhuǎn)變。由于是第一個(gè)生化實(shí)驗(yàn)，學(xué)生的期望值和積極性極高。一、原實(shí)驗(yàn)的不足1、需要水浴加熱2分鐘。如果教師不提前準(zhǔn)備好熱水加溫過程更長。2、沒有對照實(shí)驗(yàn)，沒有對照怎么能證明水浴加熱后的磚紅色沉淀就是還原糖還原而成，為什么不可能

6、是Cu(OH)2自身分解產(chǎn)生的呢？3、脂肪鑒定實(shí)驗(yàn)中，顯微鏡的操作、子葉切片都需要很長時(shí)間。特別是對于才進(jìn)高中的學(xué)生而言，要求所有的學(xué)生都能熟練運(yùn)用徒手切片技術(shù)也不現(xiàn)實(shí)。4、在學(xué)生對生物染色劑的染色特性了解不深的情況下，很難指出顯微鏡下哪些黃色或紅色的東西就是脂肪。二、實(shí)驗(yàn)的改進(jìn)之處1、選生活中常見且操作起來很方便的液態(tài)狀的牛奶，替換書上的蘋果、花生和雞蛋三類實(shí)驗(yàn)材料，節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間與消耗，2、減少實(shí)驗(yàn)器材的使用，從而簡化實(shí)驗(yàn)過程。如：不使用水浴加熱、不使用顯微鏡等。3、改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法，節(jié)省時(shí)間與試劑。如：糖的鑒定中，使用兩只試管同時(shí)直接加熱法，實(shí)驗(yàn)只

7、需幾滴斐林試劑，且反應(yīng)也只有約30秒，這樣既節(jié)省了時(shí)間與試劑，而且起到了很明顯的對照作用。4、改驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)為探究實(shí)驗(yàn)。如：給予食用油與水，用蘇丹Ⅲ染色觀察現(xiàn)象。三、教學(xué)過程1、給予實(shí)驗(yàn)任務(wù)現(xiàn)有一瓶“牛奶”，請學(xué)生用實(shí)驗(yàn)來探究牛奶中是否含有說明書中所說的糖、蛋白質(zhì)、脂肪三類成份。2、還原性糖實(shí)驗(yàn)2．1實(shí)驗(yàn)原理：牛奶中的乳糖是一種醛糖（由葡萄糖+半乳糖構(gòu)成），能還原斐林試劑（0.1%NaOH,5%CuSO4）中的Cu2+產(chǎn)生磚紅色Cu20沉淀。2．2實(shí)驗(yàn)過程①取2塊試管，編號水、牛奶；②滴加4滴斐林試劑A液，再滴加4滴斐林試劑B液，搖勻；③再分滴加7滴水

8、、牛奶搖勻；④同時(shí)用兩個(gè)試管夾夾著在酒精燈上均勻加熱30秒；⑤觀察并記錄現(xiàn)象（牛奶顯現(xiàn)磚紅色）。3、蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)3．1實(shí)驗(yàn)原