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《北京油雞cdna文庫(kù)的構(gòu)建及il-18基因克隆與表達(dá)地地研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、摘要構(gòu)建北京油雞cDNA文庫(kù)對(duì)于北京油雞遺傳資源的保護(hù)以及其基因功能的研究具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)取北京油雞肝臟組織，提取總RNA，運(yùn)用SMART刊技術(shù)構(gòu)建了北京油雞肝臟組織cDNA文庫(kù)，所構(gòu)建的eDNA文庫(kù)未擴(kuò)增文庫(kù)滴度為2．01x106pfu／mL，擴(kuò)增文庫(kù)滴度為1．17×10mpfu／mL，重組率為93．8％，平均插入片段大小約為1．0kb。本研究的實(shí)施不僅對(duì)于雞基因結(jié)構(gòu)與功能研究具有重要意義，而且對(duì)于北京油雞基因資源的保存具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)組織塊貼壁培養(yǎng)法，成功構(gòu)建了多浪羊的成纖維細(xì)胞系，并對(duì)其進(jìn)行了多項(xiàng)生物學(xué)特性檢測(cè)。檢
2、測(cè)結(jié)果表明，細(xì)胞系的各項(xiàng)指標(biāo)均達(dá)到美國(guó)典型培養(yǎng)物中心刀TCC(AmericantypeCultureCollection)細(xì)胞系鑒定標(biāo)準(zhǔn)，為研究外源基因在成纖維細(xì)胞中的表達(dá)與調(diào)控提供了優(yōu)質(zhì)的靶細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)采用BamHI與XhoT雙酶切法建立北京油雞pGEX-4T-1-IL一18原核表達(dá)載體，并在BL21菌中成功表達(dá)。采用Sa]I與BamHI雙酶切法建立北京油雞pEGFP—N3一IL—18真核表達(dá)載體，并在浪羊成紅維細(xì)胞中成功表達(dá)。關(guān)鍵詞：北京涫雞；cDNA文庫(kù)：IL-18：基因克??；表達(dá)ConstructionofeDNAlibra
3、ryandIL·-18genecloningandexpressionofBeijingFattyChicken^bstractTheeDNAlibraryofBeijingFattyChickenhasgreatsignificancehotonlyforitsprotectionofgeneticresouiv．燃butalsoforthereaseachofgenefunction．Inthisstudy，thetotalRNAwereextractedfromtheliver矗愛(ài)；u陀ofBeijingFattyChicke
4、n,andthelivertissureeDNAlibraryofBeijingFattyChickenhadbeenconstructedbyusingSMARTTMtechnique．neresultsshowthatthetiterofunamplifiedcDNAlibraryis2．01x106pfu·mL一，thetiterofamplifiedlibraryis1．17x1010pfu·mL"l，therateofrecombinantisabove93．8％，theaveragesizeofthefragmentsi
5、s1．0kb．ThisstudyisnotonlyimportantforthestructureandfunctionresearchonChickengenes,butalsoimportantfortheprotectionofgenetici'esourcesforBeijingFattyChicken．ThisstudysuccessfullyestablishedthetargetcelllineofDuolangSheepthroughdirectadherentculturemetheodsandalsosucces
6、sfullyconductedthevariouskindsofexperimentsonthebiologicalcharacteristicsofdetection-TheresultsshowthatthequalityofthecelllinemetthequalityrequirementsoftheATCC(American13哩,eCultureCollection)，indicatethatthecellswe陀welltargetcellsforgene懿pression．Inthisstudy，wealsocon
7、structedBeijingFattyChicken'sProkaryoticexpressionvectorpGEX4T—l·IL-18byadoringBamHIandXhoImethodofdoubleIes缸'ictionenzymeandwhicharealsoexpressedinBL21bacteria,wealso咖sl田哪刪BeijingFattyChicken'seukaryotieexpressionvectorpEGFP-N3一IL-18byadoptingSalIandBamHImethodofdoubl
8、erestrictionenzymeandexpressionintargetceils．Keywords：BeijmgFattyChicken；eDNAlibrary；lol8；gemcloning；expressionDirett
