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《通用探針實時熒光pcr檢測禽病毒病方法的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、關(guān)于學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)的聲明y90；)820本人所呈交的學(xué)位論文，是在導(dǎo)l棗指導(dǎo)一F，獨立遴行辯學(xué)研究所取得的成果。對在論文研究期間給予指導(dǎo)、幫助和做出重要貢獻的個人或集體，均在文孛明確醢明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。本人完全了解由衷農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)探警和使用學(xué)位論文豹援定，同意學(xué)校保留和按要求向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文紙質(zhì)本和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)nJ東農(nóng)業(yè)大學(xué)可畎將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存淪文和匯編本學(xué)位論文。保密論文在解密艏
2、應(yīng)遵守此規(guī)定。論文作者簽名：黼導(dǎo)師簽名：日期：2聰‘、提山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩十專業(yè)學(xué)位論文縮寫PCRR，r．PCRRTF．PCRDNARNAEBIPTGLBAmpTaqX—Gal中英文縮略表英文PolymerasechainreactionReverstranscriptionPCRReal．timeflurescentPCRDeoxvribonucIeicacidRibonucluncacidEthidiumbromideIsopropylthio·-B-D-galactosideLuria—Bertanimediu
3、mAmpicillinThermusaquaticu5-Bromo一4·Chloro一3一Indolyl—B—D—GalactosideM-MLVReverseTranscriptaseRnasinRibonucleaseInhibitormol／literInfectiousbronchitisvirusinfectiouslaryngotracheitisNewcastlediseasevirusHemagglutinationinhibitionDeoxyadenosinetriphosphateDeoxy
4、uridinetriphosphateDeoxycytidinetriphosphateDeoxyuridinetriphosphateDeoxythymidinetriphosphateC：cycle：t：threshouldrevolutionsperminute中文聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)反轉(zhuǎn)錄PCR實時熒光PCR脫氧核糖核酸核糖核酸溴化乙錠異丙醇一B～D一硫代半乳糖LB培養(yǎng)基氨芐青霉素水生熱棲酶5一溴一4氯一3吲哚一8一D一半乳糖M—MLV逆轉(zhuǎn)錄酶核糖核酸酶抑制劑摩爾／升傳染性支氣管炎傳染性喉氣管炎新城疫病毒血細(xì)胞
5、凝集反應(yīng)血細(xì)胞凝集抑制反應(yīng)脫氧腺苷三磷酸脫氧尿苷三磷酸脫氧胞苷三磷酸脫氧鳥苷三磷酸脫氧胸腺苷三磷酸每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達(dá)到設(shè)定閡值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)～一M州M一姒m一一一一一口通用探針實時熒光PCR檢測禽病毒病方法的研究basepairsgrammxcrogram13．a(chǎn)nometerplcrogramunitlitermicroliterVO兒Ⅱnemilliliter2堿基對兌微克納克皮克單位升微升體積毫升坤g峙岵船uL此v毗山東農(nóng)業(yè)火學(xué)碩上專業(yè)學(xué)位論文通用探針實時熒光PCR檢測禽病毒病方法的研究摘
6、要禽病毒性疾病是威脅養(yǎng)禽業(yè)最嚴(yán)重的一類傳染病，由于病毒對抗生素的不敏感性，在臨床治療上很難達(dá)到有效目的，因此免疫預(yù)防便成為預(yù)防和治療的這一類疾病有效手段，疫情監(jiān)督也就成為此措施的必要環(huán)節(jié)。盡早的發(fā)現(xiàn)病毒，并對該病毒的流行狀況作出預(yù)測是預(yù)防病毒病的關(guān)鍵，但近年來由于病毒性疾病多表現(xiàn)為亞臨床癥狀，常規(guī)檢測方法很難快速對其作出確診，故現(xiàn)代化生產(chǎn)需要建立一種快速、準(zhǔn)確、高效的檢測方法。實時熒光PCR技術(shù)是一種新型的核酸檢測技術(shù)，它從病毒的基因組著手對病毒進行檢測，在臨床診斷中已經(jīng)用于細(xì)菌、病毒及遺傳性疾病的檢測，具有極大
7、的應(yīng)用價值。本研究根據(jù)熒光PCR檢測原理，利用通用探針建立了禽病毒性疾病實時熒光PCR檢測方法。這一個研究方法不但摒棄了SYBRGreenI類熒光染料假陽性率高的弊端，而且具有快速、準(zhǔn)確、高效的特性。本研究共分為三部分：第一部分：新城疫病毒的分離和鑒定為了研究我國近年來病毒性疾病的流行情況，擬對本實驗所涉及病毒做出分離和鑒定，但是由于時間有限，故只做了新城疫病毒(Newcastlediseasevirus，NDV)的分離和鑒定工作。本部分采用雞胚尿囊腔培養(yǎng)，血凝(Hemagglutination，HA)和血凝抑制
8、(Hema991utinationinhibition，HI)，間接熒光抗體試驗(IFA)，RT～PCRJPCR試驗和基因芯片試驗對NDV進行了分離和鑒定。從全國七個省市的9個雞場53只疑似患有新城疫病的雞中，分離到28株NDV野毒株，結(jié)果說明NDV在我國普遍存在，而且呈現(xiàn)蔓延的趨勢；同時試驗結(jié)果說明基因芯片方法要優(yōu)于其他三種檢測方法，具有高度的特異性和靈敏度。第二部分：
