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《固定化金屬離子螯合瓊脂糖凝膠制備及其純化組氨酸標(biāo)簽蛋白的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、碩士論文固定化金屬離子螯合瓊脂糖凝膠的制備及其純化組氨酸標(biāo)簽蛋白的研究摘要固定化金屬離子親和層析是一種純化蛋白的優(yōu)良方法。其中，固定化金屬離子螯合瓊脂糖凝膠純化組氨酸蛋白的技術(shù)，近年來備受關(guān)注。這種方法主要利用共價作用固定在微球表面的配基與金屬離子形成螫合物，蛋白質(zhì)通過其表面基團與螯合物的配位作用達到純化蛋白的目的。具體研究內(nèi)容如下：1．以瓊脂糖凝膠(SepharoseCL．6B)作為載體，環(huán)氧氯丙烷為活化劑，分別以亞氨基二乙酸和羧甲基天冬氨酸為螯合配基，制備了親和層析介質(zhì)Sepharose．CL．6B-IDA-甜+和SepharoseCL．6B—CM．ASP．C02+。通過SE
2、M分析得出：活化前后，瓊脂糖的形貌并未發(fā)生改變，這說明瓊脂糖微球在活化過程中粒子沒有發(fā)生變形或破碎。并且探索了鎳離子親和層析介質(zhì)的影響因素，研究發(fā)現(xiàn)：當(dāng)環(huán)氧氯丙烷與基質(zhì)的體積比為O．5，亞氨基二乙酸與基質(zhì)的體積比為2，反應(yīng)時間1h時，瓊脂糖的活化效率最高。2．將制備好的Sepharose．CL．6B．IDA-Ni2+和Sepharose．CM-ASP．C02+介質(zhì)用于純化小規(guī)模六聚組氨酸融合蛋白，與商業(yè)化產(chǎn)品Ni．NTA介質(zhì)進行比較，通過SDS-PAGE分析可知：Ni．IDA介質(zhì)純化效果最好，優(yōu)于CM．ASP．C02十介質(zhì)和商業(yè)化產(chǎn)品Ni-NTA介質(zhì)，純化后目標(biāo)蛋白幾乎沒有雜質(zhì)，
3、蛋白經(jīng)過一次提純就可得到純度高的靶向蛋白。3．合成螯合配基．N．(5．氨基．1．羧戊基)．亞氨基二乙酸，通過紅外光譜和核磁譜等方法確定了產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)，采用N．(5．氨基．1．羧戊基)．亞氨基二乙酸作為螯合配基來純化蛋白質(zhì)的實驗還有待進一步研究?！ぶ苽浜玫腟epharose．CL．6B．IDA-Ni2+介質(zhì)可商業(yè)化，用于純化大規(guī)模的組氨酸蛋白。關(guān)鍵詞：金屬螯合層析；瓊脂糖凝膠；蛋白質(zhì)純化Abstract碩士論文ImmobilizedmetalIonaffinitychromatographyisagoodwayforthepurificationofprotein．Amongthem
4、，immobilizedmetalionchelateSepharoseCL-6B，anewtechnologywhichisusedforthepurificationofHis,-Taggedprotein，hasattractedmuchattentioninrecentyears．Themethodmainlyusesligandswhicharefixedonthesurfaceofmicrospheres，chelatingmetaliontoformchelatecompoundbycovalentinteraction,thentheligandsonthesur
5、faceofproteinattach、析mchelatecompoundthroughthecoordinationeffectbetweenthem．Thespecificresearchcontentsareasfollows：1．Twochelateaffinitychromatographicmediums(SepharoseCL一6B·IDA-NipandSepharose-cL一6B-CM—ASP—C01arepreparedusingSepharoseCL·6Basthecartier,epichlorohydrinastheactivatingagengthei
6、minodiaceticacidandcarboxymethylatedasparticacidaschelatingligands．ItprovesbySEM：theappearanceofScpharoseCL-6Bhasnotchangedafteractivation,andtheagaroseisnotbrokenintheprocessofactivation．ByexploringtheinfluencefactorsofSepharoseCL--6B·-IDA-Ni2+,thestudyfinds：whiletheratiobetweentheepoxychlor
7、opropaneandthematrixisO．5，theratiobetweentheiminodiaceticacidandthematrixis2,andreactiontimeislh，theeffciencyofactivationisbest．2．neypuffysmallscaleHis6·TaggedproteinusingSepharose—CL-6B-IDA-Ni肘andSepharose．CL．6B．CM．ASP．C02+．Theeffectsofthema
