資源描述：
《金屬螯合親和層析純化金屬硫蛋白 - 副本》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、生物化學(xué)與生物物理進展·金屬贅合親和層析純化金屬硫蛋白‘鐵鋒茹剛‘’李令媛劉德富‘’茹炳根北,北京京大學(xué)生物系,摘典將二價銅離子鰲合在凝膠上制成親和層析柱鋅誘導(dǎo)兔肝和福誘導(dǎo)小鼠肝經(jīng)勻漿、乙醉處理后上柱,用的醋酸鹽緩沖液平衡,再用不同濃度的醋酸鹽緩沖液分別洗脫,洗脫,經(jīng)確定先后為一一可得兩個金屬硫蛋白峰和分離方法比傳統(tǒng)一的凝膠過建離子交換法簡單、省時,適于實驗室規(guī)
2、模分離純化,,關(guān)銳詞金屬硫蛋白金屬鰲合分離純化,,金屬硫蛋白是一離子解離暴露出來的琉基與膠上鰲合的金屬,,,類分子量為一富含半朧氨酸殘基的離子結(jié)合從而使被掛在膠上當(dāng),,,金屬結(jié)合蛋白它廣泛存在于動植物體內(nèi)具提高溶液值可將洗脫下來有重要的生物學(xué)功能和應(yīng)用前景〕!從,典酸材料和方法年首次被發(fā)現(xiàn)以來至今分離純化的方法一直采用凝膠過濾次和陰離子交換層材料與儀器析的方法,們
3、凝膠為瑞一次我們試圖采用一次金,,,屬鰲合親和層析和一次凝膠過濾脫鹽來簡公司產(chǎn)品冰醋,,化的分離純化方法等化學(xué)試劑均為國產(chǎn)分析純?nèi)ルx一子蒸餾水經(jīng)公司的班超純水裝置金屬鰲合親和層析是基于各種蛋白質(zhì)分子,一內(nèi)的組氨酸、半朧氨酸、色氨酸等殘基具有與進一步純化分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白為一,,許多金屬離子發(fā)生不同程度的配位結(jié)合的特公司產(chǎn)品種蛋白分子量范圍在一,‘,一為本室自制產(chǎn)品〔二性在凝膠上結(jié)合有適當(dāng)?shù)慕饘匐x子的金屬鰲,昆明小鼠和
4、青紫藍家免由北京大學(xué)生物系動物合親合吸附劑從而使凝膠能選擇性地結(jié)合暴一露有上述氨基酸殘基的蛋白質(zhì)每分子可房提供采用美國公司的低、、、,,,結(jié)合個二價金屬離子但由于壓層析系統(tǒng)泵紫外監(jiān)測器記錄儀收集、,一中的個半朧氨酸殘基全部參與金屬離器控制器島津紫外可見分光光度,一儀本原子吸收光譜儀子的連接并在分子內(nèi)部形成四面體結(jié)構(gòu)的金屬舊,一,,英國電化學(xué)溶出分析儀山東電簇所以在一般情況下中既沒有組氨酸,和芳香氨基酸,訊七廠
5、冷凍離心機德國也沒有游離態(tài)琉基能與膠上的金屬發(fā)生結(jié)合作用根據(jù)我們從不同來源和不實驗方法,裝柱將凝膠同因素誘導(dǎo)所得的金屬成分分析來看幾,又加入,裝柱乎所有都含有在中性或弱堿性溶液中與金屬結(jié)合的能力為一一一國家資助項目〔〕因而我們采用,“北京大學(xué)分校生物系,一,,一一弱酸性溶液作為平衡液此時中有部分鋅收稿期了修期
6、生物化學(xué)與生物物理進展,,,溶液用雙蒸水洗柱柱子HCI溶液中該吸收峰消失(曲線3)即在酸性上端藍色條帶長約,再用,溶液中全部Zn被解離.一。。起始平衡緩沖液平衡柱子分離純化樣品后,用,..一,““。洗脫柱子可反復(fù)使用,用!可將CuZ+洗脫.再生柱子…!從歸、,以L2.2樣品制備體重約209昆明小鼠連:,)續(xù)4
7、d皮下注射CdCI四次累計注射錫量_,,0.2mg/只;體重約2.6kg青紫藍家兔皮下’{”5「3nSO,‘注射z累計注射鋅量86omg/只分別取、’小鼠、兔肝臟進行勻漿和乙醇沉淀處理[41,沉0「l.,.一.pH4ooae。淀溶于0olml/LNAHA190220260300..,.,入/nm123分離純化樣品液上柱先用pH4o·一,oaeeoolLmlNAHA/洗滌再分別用n一圖1zT.M的紫外吸收光譜,..,.pHS2oo005ml/L和pHS203ml/L:..n一,o4拜gzpH7o0lmlLT8/兔肝ZM/ml在一,a。。N
8、AHA,:.,.oae一,:洗脫琉基蛋白洗脫峰分別用分子ePBS2p40001LNA3.Hml/HA,,L碳酸按洗脫..篩凝膠脫鹽用004mol/冷凍o0lL.ml/HCI干燥L(fēng)
