橙皮素體外對人hepg2肝癌細(xì)胞生長及caspase-3表達(dá)的影響

橙皮素體外對人hepg2肝癌細(xì)胞生長及caspase-3表達(dá)的影響

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1、分類號R739.63學(xué)校代碼10601密級公開編號Y0901004碩士學(xué)位論文橙皮素體外對人HepG2肝癌細(xì)胞生長及Caspase-3表達(dá)的影響學(xué)科專業(yè):病理學(xué)與病理生理學(xué)天然藥物的病理學(xué)與病理生理學(xué)研究方向:研究研究生姓名:陳光煜學(xué)號:Y0901004學(xué)位類型科學(xué)學(xué)位導(dǎo)師姓名:朱華教授二O一二年五月獨創(chuàng)聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知,除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含未獲得(注:如沒有其他需要特別聲明的,

2、本欄可空)或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名:簽字日期:年月日----------------------------------------------------------------學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解桂林醫(yī)學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤,允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)桂林醫(yī)學(xué)院可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索,

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4、…………4英漢縮略詞對照表……………………………………………………………7前言……………………………………………………………………81材料與方法………………………………………………………111.1實驗材料………………………………………………………111.2主要實驗試劑………………………………………………………111.3主要實驗儀器………………………………………………………111.4實驗方法………………………………………………………122結(jié)果…………………………………………………………………262.1噻唑藍(lán)(MTT)比

5、色試驗………………………………………………262.2橙皮素抑制HepG2細(xì)胞的形態(tài)變化(倒置顯微鏡)…………272.3橙皮素作用HepG2細(xì)胞凋亡的形態(tài)改變(熒光顯微鏡)……282.4流式細(xì)胞儀檢測HepG2細(xì)胞周期及凋亡率……………………………302.5WesternBlotting法檢測Caspase-3蛋白的表達(dá)…………………………333討論…………………………………………………………………354結(jié)論…………………………………………………………………40參考文獻(xiàn)………………………………………………………………4

6、1綜述……………………………………………………………………………43攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄…………………………………………48致謝……………………………………………………………………………49橙皮素體外對人HepG2肝癌細(xì)胞生長及Caspase-3表達(dá)的影響中文摘要目的:橙皮素(Hesperetin)柑桔屬中存在的一類天然類黃酮化合物,具有抗炎癥,抗氧化,抗變態(tài)反應(yīng),保護(hù)心血管和抗腫瘤等藥效作用。其主要來源于橙皮苷的水解,其糖苷在人腸道菌群作用下水解生成橙皮素而發(fā)揮作用。在藥材陳皮、青皮、枳殼中含量也很高,是

7、其中主要的藥效活性成分之一。研究發(fā)現(xiàn)橙皮素對改善阿霉素在大鼠體內(nèi)毒性有明顯作用。但是對肝癌細(xì)胞抑制作用的研究國內(nèi)外未見相關(guān)報道。本實驗通過觀察橙皮素單體對人HepG2肝癌細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響以及Caspase-3蛋白表達(dá)的影響,為進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)橙皮素抑制腫瘤細(xì)胞生長的機制奠定理論基礎(chǔ)。方法:-1-1-11.采用MTT法檢測不同濃度(4mmol·L、1mmol·L、0.25mmol·L、-1-1-10.0625mmol·L)的橙皮素以及不同濃度(50μg·ml、25μg·ml、12.5-1-1μg·ml、

8、6.25μg·ml)的順鉑在不同時間(24h、48h、72h、96h)作用下對HepG2細(xì)胞的體外增殖抑制效應(yīng)。-1-12.在倒置相差顯微鏡下觀察不同濃度(1mmol·L、0.5mmol·L)-1的橙皮素和25μg·ml的順鉑作用HepG2細(xì)胞后的細(xì)胞形態(tài)變化。-13.利用hoechst33342染色在熒光顯微鏡下觀察不同濃度(1mmol·L、

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