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1、大蒜素誘導(dǎo)人肝癌HepG2細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制張玉碧1呂林華2呂立華屮(1邵陽市中心醫(yī)院血液腫瘤科湖南邵陽422000)(2中山大學(xué)附一院廣東廣州510080；3邵陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校藥學(xué)系湖南邵陽422000)【中圖分類號(hào)】R735.7【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1672-5085(2011)47-0231-02【摘要】目的探討大蒜素對(duì)體外培養(yǎng)的人肝癌HepG2細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用及其分子機(jī)理。方法采用TUNEL法檢測大蒜素對(duì)HepG2細(xì)胞凋廣的影響，提取Bcl-2基因的mRNA,以RT-PCR方法研究大蒜素對(duì)Bcl-2基因表達(dá)的影響。結(jié)果大蒜素使人HepG2細(xì)胞凋亡指數(shù)增
2、加(P<0.01),冃呈劑量依賴效應(yīng);Bcl-2基因mRNA水平隨大蒜素濃度升高而降低。結(jié)論大蒜素可促進(jìn)人HepG2細(xì)胞的凋亡過程，并使Bcl-2基因mRNA水平降低，從而起到抗腫瘤的治療作用?探討大蒜素體內(nèi)外誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制?！娟P(guān)鍵詞】大蒜素肝癌HepG2細(xì)胞細(xì)胞凋亡Bcl-2mRNATheEffectofAllicinonAPoPtosisofHumanLiverCancerCellHePG2inVitroandItSMechanism【Abstract]ObjectiveToinvestigatethePromtionofAllic
3、inonAPoPtosisofHumanLiverCancerCellLineHePG2inVitroandItSMeChanism.MethodsTodetecttheeffectontheapoptosisbyTUNELmethod,toobservetheeffectontheBcl-2geneRNlevelbyRT-PCRmethod.ResultsAllicinmadeindexinereaseinadose-dependentmanner(P<O.01).ThelevelofmRNAofBcl-2geneinereasedastheconcentrati
4、onofAllicindecreased.ConelusionAllicincanfacilitatetheapoptosisofHepG2cellandmakethelevelofMrnaofBcl-2decreased.[Keywords】AllicinLivercancercellApoptosis大蒜素是從大蒜球莖中提取的含硫化合物，具有強(qiáng)大的抗炎作用⑴,近年研究發(fā)現(xiàn)大蒜素具有防癌、抗癌的特點(diǎn)［2］。本文通過研究體外誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞凋亡的作用的影響，以及檢測大蒜素對(duì)Bd-2因表達(dá)水平的影響,研究其抗腫瘤的機(jī)理，為更好地發(fā)大蒜素的臨床應(yīng)用價(jià)值提供理論與實(shí)
5、驗(yàn)依據(jù)。1材料HepG2細(xì)胞株;DMEM培養(yǎng)基（美國Hyclone）；小牛血清（杭州四季青公司）；Tunel試劑盒（南凱基生物科技發(fā)展有限公司）；大蒜索（邵陽醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校藥學(xué)系，0?5"1,乙醇法提?。CL-2基因引物由寶泰克生物技術(shù)公司合成；RT-PCRkit（寶生公司）;PCR擴(kuò)增儀（MinicvclerM7Research）o2方法2.1細(xì)胞培養(yǎng)將HepG2細(xì)胞培養(yǎng)在含量10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件：37°C、100%濕度、5%CO2、95%空氣，每24h換液1次。2.2TUNEL檢測細(xì)胞凋亡將5×107/L細(xì)胞懸液接種于35mm培
6、養(yǎng)皿，將用多聚賴氨酸處理的無菌蓋玻片置于培養(yǎng)皿內(nèi)，37°C,5%CO2,培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，使細(xì)胞自然在蓋玻片上貼壁生長。24h后分別加人無菌的大蒜素溶液（0.5g/L）10,20,30,40,50μL,使最終濃度分別為50,100,150,200,250mg/L,各組設(shè)3個(gè)重復(fù)，對(duì)照組加100&mu兒培養(yǎng)液，在37°C,5%CO2條件下繼續(xù)培養(yǎng)48ho棄培養(yǎng)皿內(nèi)的培養(yǎng)液，37°C,PBS輕洗3次，以4%聚甲醛固定。按照原位凋亡細(xì)胞檢測試劑盒說明書行操作。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn):在光學(xué)顯微鏡下觀察，胞核成棕紅色，胞質(zhì)中有散在較淺著色的細(xì)胞為凋亡細(xì)，計(jì)數(shù)至少1000個(gè)細(xì)胞。凋亡指數(shù)二
7、凋亡細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞數(shù)×100%o2.3RT-PCR檢測Bcl-2基因mRNA表達(dá)取培養(yǎng)24h后的HepG2細(xì)胞，以Trizol法提取總RNAo逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增按RT-PCR試劑盒說明書進(jìn)行，PCR擴(kuò)增體系為50μL。Bcl-2>GAPDH的引物由寶泰克生物技術(shù)公司合成。Bcl-2mRN探針序歹嘰5’?GGAGCGTCAACAGGGGATTG-37,5’-GATGCCGGTCAGGTACTCAG?3‘上游引物和下游引物務(wù)2μL,Taq酶2U,與逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA混勻，瞬時(shí)離心;擴(kuò)增條件：94°C2min、
