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《共表達(dá)豬細(xì)小病毒vp2和豬圓環(huán)病毒2型cap的重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文共表達(dá)豬細(xì)小病毒VP2和豬圓環(huán)病毒2型Cap的重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其鑒定姓名：鄧曉輝申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：崔言順20120612山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要偽狂犬病毒(PseudorabiesVirus，PRV)、豬細(xì)小病毒(Porcineparvovirus，PPV)、豬圓環(huán)病毒2型(PorcinecircovirusType2，PCV2)是危害當(dāng)今養(yǎng)豬業(yè)的三種重要病原，分別引起豬的偽狂犬病、豬細(xì)小病毒病與豬圓環(huán)病毒2型病。豬偽狂犬病和豬細(xì)小病毒病是以引起豬群發(fā)生繁殖障礙為特征的傳染病，在我國很多豬場流行，嚴(yán)重制約了養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。豬圓環(huán)病
2、毒2型與豬多種疾病綜合征有關(guān)，尤以仔豬斷奶后多系統(tǒng)衰弱綜合征危害最大，目前呈世界性分布，給養(yǎng)豬業(yè)生產(chǎn)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。偽狂犬病毒具有宿主范圍廣、不感染人、基因組容量大，含多個可缺失的非必需基因、重組病毒穩(wěn)定的特點，加之豬偽狂犬病病毒基因缺失疫苗的成功應(yīng)用，以PRV為載體表達(dá)其它病原主要免疫原性蛋白質(zhì)構(gòu)建重組偽狂犬病毒成為基因工程疫苗的研究熱點，尤以PRV．Bac系統(tǒng)最為便捷。本研究在TK基因缺失的PRVZJ株Bac的基礎(chǔ)上插入PPVVP2和PCV2Cap基因，旨在研制PRV、PPV、PCV2三聯(lián)基因工程疫苗，通過口蹄疫病毒2A基因?qū)PVVP2基因和PCV2Cap基因串聯(lián)，得至UVP2．
3、2A．Cap(V2C)基因，將其插／入pEP—CMV．in轉(zhuǎn)移載體構(gòu)建pEP．V2C．in重組表達(dá)質(zhì)粒，再通過RedE／T兩步重組法構(gòu)建TpPRV—V2C·AgE和pPRV一△啦突變體，該突變體用磷酸鈣法轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞獲得重組病毒rPRV-V2C一△gE和rPRV．AgE。Westernblot分析表明rPRV．V2C．AgE能在BHK．21細(xì)胞內(nèi)表達(dá)融合蛋白VP2．2A．Cap，且目的蛋白能被2A蛋白裂解為64ku和28ku兩個片段。重組病毒生長曲線和噬斑大d,afJ定結(jié)果顯示rPRV．V2C．△gE在BHK．21細(xì)胞中的增殖滴度與親本株rPRV無顯著差異，表明外源基因的插入不影響r
4、PRV的增殖。本研究為PRV、PPV和PCV2三聯(lián)重組活載體疫苗的研制奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：PRV細(xì)菌人工染色體；豬細(xì)小病毒；豬圓環(huán)病毒2型；基因工程疫苗Abs仃actPseudorabiesvirus(PRV)，PorcineParvovirs(ppV)andPorcinecircovirustype2arethreeimportantpathogensofswine，resultingindevastatingandeconomiclossworldwide·PseudorabiesvirusdiseaseandPorcineParvovirusdiseaseareinfectioussw
5、inewhichinducespregnantswineabortion,stillbirths．Porcinecircovirustype2isaswinevirus，whichassociatedfromvariousdiseasesyndromesinswinesandresultinginmassiveeconomiclossworldwide．PRVisthebestvirusasavectorwhichusedtoexpressforeigngene，becauseofthegenomeofPRVDNAabout150Kb，whichcontainsmanynonessentia
6、lgene，broadesthostrange．Witllmegene．deletedpseudorabiesvirus(PRV)whichhasbeenusedasthevaccineforeradicationPseudorabiesvirusdiseaseandalive．viralvaccinevectortodevelopbivalentormultivalentgeneticengmeenngvaccine．●‘●ThisstudybasedonthebacterialartificialchromosomeofPRV,whichthegeneofgEhasbeendeleted
7、，todevelopmentofporcinePseudorabiesvirus(PRV)，PorcineParvovirus(PPV)andPorcinecircovirustype2(PCV2)trivalentinactivatedvaccine，therecombinantplasmidpEP．V2C．inwasconstructedbyinsertingVP2-2A—Cap(V2C)gene，whi
