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1、中國中醫(yī)科學(xué)院碩士學(xué)位論文基于成分分析與血管活性的元胡止痛片質(zhì)量評價姓名：張迎春申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：中藥學(xué)指導(dǎo)教師：楊洪軍；李慧；許海玉20120522中國中醫(yī)科學(xué)院-'oo九級碩士研究生學(xué)位論文摘要元胡止痛片由延胡索(醋制)、白芷兩味中藥組成，具有理氣、活血、止痛的功效，用于氣滯血瘀的胃痛、脅痛、頭痛及痛經(jīng)，收載于1985年及其以后各版《中國藥典》中。延胡索中的生物堿類和白芷中的香豆素類成分具有較強(qiáng)的藥理作用，為方中主要活性成分。目前多以一個或幾個主要成分的含量對元胡止痛片進(jìn)行質(zhì)量控制研究，難以全面反映其質(zhì)量。本論文采用指紋圖譜、多成
2、分定量分析等技術(shù)，較全面了解化學(xué)信息的基礎(chǔ)上，結(jié)合腸吸收．體外活性聯(lián)用方法進(jìn)行離體血管活性實驗研究，從不同角度綜合評價了元胡止痛片的質(zhì)量優(yōu)劣，為制訂科學(xué)合理的質(zhì)量控制方法奠定了基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：一、元胡止痛片指紋圖譜研究建立了快速靈敏的UeLC／Q．TOF．MS分析方法用于15批次元胡止痛片的指紋圖譜研究，明確了其中的18個共有成分。并對共有成分進(jìn)行分析鑒定，根據(jù)質(zhì)譜信息及相關(guān)文獻(xiàn)鑒定了其中的15個成分，分別為原阿片堿、甜別隱品堿、黃連堿、延胡索乙素、四氫小檗堿、紫堇堿、巴馬汀、小檗堿、白當(dāng)歸腦、脫氫紫堇堿、氧化前胡素、歐前胡素、珊瑚
3、菜素／8．甲氧基異歐前胡內(nèi)酯、異歐前胡素、蛇床子素。通過成分鑒定明確了方中的整體化學(xué)信息，為定量分析成分的選擇及質(zhì)量評價提供重要參考。以共有成分為特征進(jìn)行聚類分析，評價了樣品間的變異性，所有樣品共聚為兩類，發(fā)現(xiàn)同一廠家的樣品變異較小，基本能聚為一類。二、元胡止痛片多成分定量分析建立了RRLC．QQQ分析技術(shù)對元胡止痛片進(jìn)行定量分析，17個成分在9min內(nèi)完全分析完畢，分別為東莨菪內(nèi)酯、原阿片堿、a埸U隱品堿、延胡索乙素、黃連堿、四氫小檗堿、紫堇堿、小檗堿、白當(dāng)歸腦、白當(dāng)歸素、花椒毒素、佛手柑內(nèi)酯、茴芹內(nèi)酯、氧化前胡素、歐前胡素、蛇床子素、異
4、歐前胡素。分析結(jié)果表明各成分含量有較大差異，原阿片堿、延胡索乙素、黃連堿、紫堇堿、白當(dāng)歸素、歐前胡素、異歐前胡素等為方中主要的高含量成分，其中指標(biāo)性成分延胡索乙素含量最高，平均含量為313．06lag／g,東莨菪內(nèi)酯和蛇床子素含量極基于成分分析與血管活性的元胡止痛片質(zhì)量評價低，不足1．00Izg／g。延胡索乙素在不同樣品中含量也有較大差異，在S15、S13、S12樣品中含量最高(S表示樣品)，在Sl～S6樣品中含量較低。以17成分含量總和計，S12、S13、S14樣品中含量最高，S7～Sll樣品中含量最低。以17個成分含量為特征進(jìn)行聚類分析
5、，發(fā)現(xiàn)其結(jié)果與指紋圖譜聚類分析結(jié)果基本一致，也能體現(xiàn)樣品的整體化學(xué)信息。所建立的方法簡單、靈敏、可重復(fù)，可用于元胡止痛片的多成分定量研究及質(zhì)量評價。三、腸外翻．離體血管聯(lián)用方法的建立本文建立了腸外翻．離體血管聯(lián)用方法，首先通過腸外翻囊吸收實驗，制備元胡止痛方提取物的含藥腸吸收液，將其作為離體血管實驗的樣品，應(yīng)用于元胡止痛方提取物的血管活性評價。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，所建立的聯(lián)用方法精密性、重復(fù)性、靈敏性較好，可用于實驗研究。元胡止痛方提取物的含藥腸吸收液具有較好的舒張血管效應(yīng)，隨濃度／劑量的增高而效應(yīng)增強(qiáng)，高(生藥0．16g／mL)、中(生藥0．0
6、8g／mL)、低(生藥0．04g／mL)濃度最終分別達(dá)到81．534-3．98％、66．85士10．0l％和43．644-17．83％的血管舒張率，呈量效及濃度依賴關(guān)系，空白腸吸收液沒有表現(xiàn)出血管活性。與常規(guī)體外藥理實驗相比，本文所建立的聯(lián)用方法排除了不被吸收成分及成分生物利用度的影響，更能合理地反映樣品的真實生物活性。四、元胡止痛片腸吸收成分分析基于已經(jīng)建立的RRLC．QQQ分析方法，對腸吸收實驗前后方中l(wèi)7個化學(xué)成分含量進(jìn)行測定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，17個成分均能通過腸囊被吸收，且提取物中各成分腸吸收量在高濃度下最高，低濃度最低，呈濃度依賴性。提
7、取物中的7個高含量成分是紫堇堿、黃連堿、歐前胡素、原阿片堿、異歐前胡素、a．別隱品堿和延胡索乙素；而經(jīng)過腸吸收過程后，腸吸收液中的高含量成分分別為原阿片堿、紫堇堿、a．別隱品堿、延胡索乙素、黃連堿、白當(dāng)歸素和歐前胡素。以此看出，與提取物相比，腸吸收液中的成分含量有較大變化。不同成分腸吸收率亦有較大差別，以白當(dāng)歸腦(87％)和白當(dāng)歸素(85％)等吸收率較高；而歐前胡素、蛇床子素、歐前胡素等吸收率較低，不足0．5％。實驗結(jié)果顯示了各成分吸收率的差異性，同時也證明了含藥腸吸收液作為體外藥理實驗的科學(xué)合理性。五、基于腸外翻．離體血管聯(lián)用方法的元胡止
8、痛片血管活性評價中田中醫(yī)科學(xué)院--oo九級碩士研究生學(xué)位論文運(yùn)用己建立的腸外翻．離體血管聯(lián)用方法對其中9批次元胡止痛片進(jìn)行了血管活性評價。結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同批次元胡止痛片腸吸收液均能產(chǎn)
