臍帶間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)分化成肝樣細胞的研究

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1、臍帶間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)分化成肝樣細胞的研究計：學位論文：28頁表格：5個插圖：5幅王永霞指導(dǎo)教師：姜春萌教授申請學位級別：碩士學位論文提交日期：2012年4月學位授予單位：大連醫(yī)科大學專業(yè)名稱：內(nèi)科學論文答辯日期：2012年5月學位授予日期：2012年6月評閱人：答辯委員會主席：獨雌聲明嗍本人聲明所呈交的學位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得大連醫(yī)科大學或其他教育機構(gòu)的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何

2、貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文作者簽名：垂丞盛簽字日期：皿年上月上日目錄一、摘要??????????????????????????1(一)中文摘要??????????????????????1(二)英文摘要??????????????????????3二、正文??????????????????????????5(一)前言????????????????????????5(一)丹U舌????????????????????????，(二)材料與方法????????????????????5(三)結(jié)果????????????????

3、???????8(四)討論???????????????????????15(五)結(jié)論???????????????????????17(六)參考文獻?????????????????????18三、綜述?????????????????????????20(一)綜述??????????????????????20(二)參考文獻?????????????????????25四、致謝?????????????????????????28臍帶間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)分化成肝樣細胞的研究碩士生姓名：王永霞指導(dǎo)教師：姜春萌教授專業(yè)名稱：內(nèi)科學摘要目的：通過分離人臍帶問

4、充質(zhì)干細胞(umbilicalcordmesenchymalstemcells，UCMSCs)，采用系列細胞因子聯(lián)合誘導(dǎo)，探索高效可靠的體外誘導(dǎo)分化為肝樣細胞的技術(shù)方法。方法：采用健康產(chǎn)婦臍帶，用酶消化法分離、培養(yǎng)臍帶問充質(zhì)干細胞(UCMSC)；流式細胞儀檢測細胞抗原CDl3、CD44、CDl05、CD34、CD45、HLA．DR表達情況，鑒定分離的細胞是否為UCMSCs；用肝細胞生長因子(hepatocytegrowthfactor，HGF)、成纖維細胞生長因子一4(Fibroblastgrowthfactor-4FGF一41及白細胞介素6(／nte

5、rleukin一6IL．6)進行組合分組：A組：僅基礎(chǔ)培養(yǎng)基，即為陰性對照組；B組：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+HGF+FGF一4：C組：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+HGF+IL-6；D組：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+HGF+FGF．4+IL．6誘導(dǎo)培養(yǎng)第3代(P3)的臍帶MSCs，用免疫細胞化學法檢測細胞標志物AFP、ALB的表達情況，比較各個誘導(dǎo)組誘導(dǎo)成肝樣細胞的細胞比例。數(shù)據(jù)用均數(shù)士標準差(x士s)表示，采用SPSSl8．0統(tǒng)計分析軟件包進行分析，用單因素方差分析對資料進行統(tǒng)計分析。結(jié)果：1．UCMSC的細胞形態(tài)接種的UCMSC多于48小時后貼壁，5天后有短梭形細胞長出，后漸由短梭形變?yōu)榧氶L扁

6、平的長梭形，15天后出現(xiàn)梭形細胞集落，呈漩渦狀或長條形生長，1月后細胞相互接觸，并鋪滿整個培養(yǎng)皿底部。2．UCMSC鑒定取培養(yǎng)至第三代(P3)的臍帶間充質(zhì)干細胞行流式細胞儀檢測細胞表面抗原表達，反映間充質(zhì)干細胞的表面抗原CDl3、CD44、CDl05表達陽性，表達率分別為99．0％、98．4％、98．4％，而造血干細胞標志物CD34、CD45、HLA—DR表達陰性，表達率分別為4．6％、9．48％、5．04％。3．UCMSC的誘導(dǎo)分化3．1誘導(dǎo)成肝樣細胞的細胞形態(tài)取培養(yǎng)至第三代的UCMSCs加入各細胞因子組合向肝樣細胞誘導(dǎo)，經(jīng)3-4周呈放射狀的細胞排列

7、結(jié)構(gòu)逐步消失，長梭形細胞變類圓形或多角形，存在離散現(xiàn)象，胞漿出現(xiàn)顆粒，部分出現(xiàn)雙核。3．2肝樣細胞標志物表達對誘導(dǎo)出的肝樣細胞行其標志物甲胎蛋白(AFP)及白蛋白(ALB)檢測顯示：A組始終沒有見到肝樣細胞的標志物白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(AFP)的表達。而B、C、D組可以檢測到肝細胞的標志物AFP、ALB的表達，AFP在誘導(dǎo)7天時，不同誘導(dǎo)組(B、C、D)比較，D組表達率最高；至15天時各組表達均減少，但D組仍最高；至誘導(dǎo)20天時各組表達均消失。而ALB在誘導(dǎo)7天、15天、20天都有強表達。在誘導(dǎo)第7天，B組表達率最高；誘導(dǎo)15天、20天，B、D組

8、表達率高于C組。結(jié)論：1．使用酶消化法可以從人臍帶中成功分離、培養(yǎng)出UCMSC。2．應(yīng)用肝細胞