人外周血間充質(zhì)干細(xì)胞向肝樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)的研究

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1、徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文縮略詞表Abbreviation縮略詞英文全稱中文全稱AFPα-Fetoprotein甲胎蛋白ALBAlbumin白蛋白BSABovineserumalbumin牛血清白蛋白cDNAComplementaryDNA互補(bǔ)DNACFU-FColonyformingunit-fibroblast成纖維細(xì)胞集落形成單位CocktailHumanmesenchymalstemcell人間充質(zhì)干細(xì)胞富集試劑enrichmentcocktailDNADeoxyribonucleicacid脫氧核糖核酸dNTPDeoxynucleosidetriphosphate脫氧核苷三磷酸EDT

2、AEthylenediaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸ESEmbryonicstemcells胚胎干細(xì)胞FACSFluorescence-activatedcellsorter流式細(xì)胞儀FBSFetalbovineserum胎牛血清FGF-4Fibroblastgrowthfactor-4成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-4FITCFluoresceinisothiocyanate異硫氰酸熒光素G-CSFGranulocyte-colonystimulatingfactor粒細(xì)胞集落刺激因子HGFHepatocytegrowthfactor肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子HMHepatocytemed

3、ium肝細(xì)胞培養(yǎng)基IGF-IInsulin-likegrowthfactor-I胰島素樣生長(zhǎng)因子ITSInsulintransferrinselenium胰島素鐵硒傳遞蛋白L-GluL-GlutamineL-谷氨酰胺1徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文MNCsMonocyticcells單個(gè)核細(xì)胞MSCsMesenchymalstemcells間充質(zhì)干細(xì)胞ODOpiticaldensity吸光度OSMOncostatinM抑瘤素MPBSPhosphatebufferedsolution磷酸鹽緩沖液PMSFPhenylmethanesulfonylfluoride苯甲基磺酰氟RBITCRhodamine

4、Bisothiocyanate羅丹明RT-PCRReal-timepolymerasechainreaction實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)2徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。論文中除了特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,不包含其他人或機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果。其他同志對(duì)本研究的啟發(fā)和所做的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的聲明并表示了謝意。作者簽名:日期:200年月日論文使用授權(quán)聲明本人完全了解徐州醫(yī)學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,即:學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和電子文檔,允許論文被查閱和借閱;學(xué)??梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容,可以采用影印、

5、縮印或其它復(fù)制手段保存論文。保密的論文在解密后遵守此規(guī)定。作者簽名:導(dǎo)師簽名:日期:200年月日徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文論文審閱認(rèn)定書研究生在規(guī)定的學(xué)習(xí)年限內(nèi),按照研究生培養(yǎng)方案的要求,完成了研究生課程的學(xué)習(xí),成績(jī)合格;在我的指導(dǎo)下完成本學(xué)位論文,經(jīng)審閱,論文中的觀點(diǎn)、數(shù)據(jù)、表述和結(jié)構(gòu)為我所認(rèn)同,論文撰寫格式符合學(xué)校的相關(guān)規(guī)定,同意將本論文作為學(xué)位申請(qǐng)論文送專家評(píng)審。導(dǎo)師簽名:日期:200年月日徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文人外周血間充質(zhì)干細(xì)胞向肝樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化的實(shí)驗(yàn)研究中文摘要目的探討人外周血來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)的體外分離擴(kuò)增、培養(yǎng)生長(zhǎng)以及誘導(dǎo)分化成有功能的肝樣細(xì)胞的可行性。方法抽取經(jīng)粒

6、細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)充分動(dòng)員及未經(jīng)動(dòng)員的成人外周?血15-55ml,應(yīng)用密度梯度離心法及使用特殊的RosetteSepHumanMesenchymalStemCellEnrichmentCocktail試劑,分離外周血中的MSCs,貼壁純化擴(kuò)增。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)G-CSF動(dòng)員過(guò)的外周血中造血系來(lái)源細(xì)胞過(guò)多,最終選用將未動(dòng)員外周血中得到的MSCs進(jìn)行表型鑒定,并在HGF、FGF-4和OSM誘導(dǎo)下分化成為肝樣細(xì)胞。使用免疫熒光染色、Westernblot、RT-PCR、電鏡等方法檢測(cè)分析肝樣細(xì)胞的功能和誘導(dǎo)分化能力。結(jié)果在經(jīng)G-CSF充分動(dòng)員的外周血中可以密度梯度離心法分離獲得MSCs,6

7、數(shù)目約為3310,但造血系細(xì)胞過(guò)多,影響培養(yǎng)結(jié)果。在未經(jīng)動(dòng)員的成人靜脈血?中,應(yīng)用RosetteSepHumanMesenchymalStemCellEnrichmentCocktail分離可以6獲得MSCs,數(shù)目約為0.7-0.9310,并通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面抗原進(jìn)一步證實(shí)。所得細(xì)胞經(jīng)過(guò)貼壁純化擴(kuò)增和誘導(dǎo)分化,利用光鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、免疫熒光標(biāo)記檢測(cè)細(xì)胞對(duì)于ALB及AFP的表達(dá)、Westernblot檢測(cè)蛋白水平上

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