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1、鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文我國網(wǎng)絡(luò)輿論監(jiān)督研究姓名：劉栩靜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：行政管理指導(dǎo)教師：楊朝聚201205摘要摘要目的P2X7受體是一種ATP門控的非選擇性陽離子通道受體，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)主要表達(dá)在小膠質(zhì)細(xì)胞上，而在外周神經(jīng)系統(tǒng)的背根神經(jīng)節(jié)(DorsalRootGanglion，DRG)內(nèi)表達(dá)在衛(wèi)星細(xì)胞上。其激活后可引起Na+，Ca2+的內(nèi)流以及l(fā)(+離子的外流，同時(shí)調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)IL．1p的成熟和釋放。雖然近年來已有少量文獻(xiàn)報(bào)道，P2X7受體與神經(jīng)痛模型疼痛的發(fā)生密切相關(guān)，但是對(duì)于P2X7受體在神經(jīng)痛疼痛發(fā)
2、生機(jī)制中的作用仍然不是很清楚。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用脊神經(jīng)高位結(jié)扎(SpinalNerveLigadon，SNL)神經(jīng)痛模型大鼠，運(yùn)用免疫熒光、ELISA技術(shù)來探討P2X7受體在神經(jīng)痛疼痛發(fā)生機(jī)制中的作用。方法制作SNL大鼠神經(jīng)病理性疼痛模型，測(cè)定疼痛閾值的經(jīng)時(shí)變化過程，以便進(jìn)行后續(xù)研究。采用蛛網(wǎng)膜下腔給藥的方法，將P2X7受體特異性拮抗劑考馬斯亮藍(lán)(BrilliantBlueG，BBG)注射到SNL模型大鼠體內(nèi)，每日一次，每次lO此(10州)，連續(xù)7日。同時(shí)，使用VonFreyFilament來測(cè)定大鼠機(jī)械性痛閩的變化情況。然
3、后，取大鼠腰骶膨大處脊髓和L4，L5，L6DRG，運(yùn)用免疫熒光技術(shù)觀察大鼠脊髓背角上的星形膠質(zhì)細(xì)胞以及DRG上衛(wèi)星細(xì)胞的激活情況。最后，運(yùn)用ELISA技術(shù)檢測(cè)大鼠腰骶膨大處脊髓背角內(nèi)IL-Ip的蛋白含量。結(jié)果SNL大鼠機(jī)械性痛閾經(jīng)時(shí)曲線顯示，手術(shù)后第3天大鼠術(shù)側(cè)腳出現(xiàn)疼痛行為，此疼痛行為可一直持續(xù)四周，其中第5天到第15天這段時(shí)間內(nèi)疼痛最為敏感和穩(wěn)定，縮足閾pawWithdrawThreshold,PWT)≤49。而SNL大鼠手術(shù)對(duì)側(cè)腳和正常組大鼠則無疼痛行為發(fā)生。隨后，選取SNL大鼠疼痛最敏感和最穩(wěn)定的時(shí)期，將SD
4、大鼠分為5組，即模型組(SNL手術(shù))、陽性組(SNL術(shù)后注射BBG)、陰性對(duì)照組(SNL術(shù)后注射生理鹽水)、正常組(無任何處理)和假手術(shù)組。陰性對(duì)照組大鼠在第3天、第5天、第7天的縮足閾分別為4．77士1．339，5．22士1．028，4．04士1．679，與模型組大鼠相比無顯著性差異，而陽性組大鼠在以上時(shí)間點(diǎn)的PWT則顯著升高，分別為8．28+1．579、7．9+2．129、7．12+1．389。在免疫熒光試驗(yàn)中，可觀察到鞘內(nèi)注射BBG第7天，陽性組大鼠手術(shù)同側(cè)腰骶膨大處脊髓背角內(nèi)以及L5DRG內(nèi)GFAP的表達(dá)量與
5、陰性對(duì)照組和模型組相比都有摘要所下降；在ELISA試驗(yàn)中，可觀察到鞘內(nèi)注射BBG第7天，陽性組大鼠腰骶膨大處脊髓背角內(nèi)Ⅱ，1B的蛋白含量與陰性對(duì)照組相比下降了32％。結(jié)論在SNL神經(jīng)痛模型大鼠的中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)，抑制P2X7受體的激活可降低脊髓內(nèi)成熟兒一1p的蛋白含量，抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活；在SNL神經(jīng)痛模型大鼠的外周神經(jīng)系統(tǒng)DRG內(nèi)，抑制P2X7受體可抑制衛(wèi)星細(xì)胞的激活。因此，P2X7受體可能通過調(diào)控m．1p的成熟和釋放來間接調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活，同時(shí)直接調(diào)節(jié)衛(wèi)星細(xì)胞的激活從而介導(dǎo)了神經(jīng)痛疼痛行為的發(fā)生。關(guān)鍵詞P
6、2X7受體神經(jīng)痛SNL大鼠蛛網(wǎng)膜下腔注射縮足閾ⅡAbstractObjectiveP2X7RisaATP-selectivevoltage-gatedionchannel，whichisprimarilyexpressedinmicrogliainCentralNervousSystemandsatellitecellofdorsalrootgangliainPeripheralNervousSystem．TheactivationofP2X7RallowsinfluxofNa+、Ca2+andoutfluxofK+
7、，meanwhileitcallmediatetheactivationofmicrogliabytriggeringthematurationandexteriorizationofIL-18inmicroglia．ThoughsomeresearchershavedemonstratedthatP2X7Risinvolvedintheregulationofneuropathicpain，theunderlyingmechanismsarenotfullyexplored．Inthisstudyweusedimm
8、unohistochemistry、ELISAtoexploretherolesP2X7Rplaysinthespinalcordligation(SNL)modelratsofneuropathicpam·MethodsFirst,wemadethetime-courseofpawwithdrawalthresholdof汛ratsandfo
