茅蒼術(shù)多糖的提取工藝研究 畢業(yè)論文

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1、茅蒼術(shù)多糖的提取工藝研究1概述1.1茅蒼術(shù)的性質(zhì)及作用茅蒼術(shù)為菊科植物茅蒼術(shù)Atractylodeslancea(Thunb．)DG．或被蒼術(shù)的干燥根莖。原本是茅山蒼術(shù)的簡稱，其質(zhì)量和療效優(yōu)異為歷代醫(yī)家推崇和肯定，江蘇茅山地區(qū)被認為是茅蒼術(shù)的地道產(chǎn)地。史載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。味甘，苦；性溫，歸脾、胃、肝經(jīng)。具有燥濕健脾，祛風(fēng)散寒，明目的功效。主要用于脘腹脹滿，泄瀉，水腫，腳氣痿痹，風(fēng)濕痹痛，風(fēng)寒感冒，夜盲等癥[1]。中醫(yī)臨床使用歷史悠久。《本草綱目》記載“蒼術(shù)，山薊也，又名仙術(shù)，異術(shù)言術(shù)者山之精也，服之令人長生辟谷致神仙，故有仙精，仙術(shù)之號”。其主產(chǎn)于江蘇、湖北、河南等

2、地。多糖類在自然界生物中廣泛存在，具有廣譜化學(xué)結(jié)構(gòu)和生物功能，越來越受到人們的關(guān)注，其免疫、降糖等活性與其所含單糖、糖醛酸、蛋白等成分結(jié)構(gòu)有密切的關(guān)系?，F(xiàn)代藥理研究認為蒼術(shù)具有治療胃潰瘍、抗菌、抗缺氧、抗癌及治療帕金森氏綜合癥等多種生物活性[2]。1.2茅蒼術(shù)多糖的研究概況江蘇句容茅山為其道地產(chǎn)區(qū)，因而得名茅蒼術(shù)。茅蒼術(shù)不僅是一種燥濕健脾的常用中藥，而且道家(尤其是茅山道士)用于抗衰老已經(jīng)有兩千多年的歷史。迄今，對茅蒼術(shù)的研究多集中在對揮發(fā)性成分的化學(xué)和藥理研究上，對水溶性成分的研究報道較少，近年來已有報道蒼術(shù)中的水溶性多糖具有腸免疫活性，對湖北產(chǎn)茅蒼術(shù)的多糖作了研究

3、，結(jié)果表明其具有腸免疫活性、抗假絲酵母菌感染等作用，且活性與多糖中阿拉伯半乳糖及糖醛酸性部位相關(guān)。但對蒼術(shù)多糖的提取工藝研究國內(nèi)外很少有見報道[3][4]。本文對江蘇茅山地區(qū)茅蒼術(shù)多糖的工藝進行了研究和最佳工藝得率的多糖進行了分離純化及含量測定，本研究采用熱水提取方法，提取次數(shù)、提取時間、選取料液比及溫度4個因素，在單因素實驗的基礎(chǔ)上，采用L9（3）正交實驗對茅蒼術(shù)水溶性多糖進行最佳提取工藝研究，用色譜等方法對茅蒼術(shù)的多糖進行分析，對主要純化多糖APW1～4，通過氣相色譜等分析確定茅蒼術(shù)多糖中各種單糖組成及比例，通過斜率校正系數(shù)法測定單糖的含量、糖醛酸含量及蛋白質(zhì)含量

4、，為進一步研究其化學(xué)結(jié)構(gòu)和生物活性提供了基礎(chǔ)。以期為茅蒼術(shù)的進一步活性研究與應(yīng)用提供依據(jù)[5]。為了尋找茅蒼術(shù)的有效成分，筆者對茅蒼術(shù)進行了較系統(tǒng)的化學(xué)成分研究。通過單因素三水平等一系列實驗，獲得茅蒼術(shù)的乙醇提取物——多糖，將茅蒼術(shù)的乙醇提取物所得浸膏，通過溶劑萃取、硅膠柱色譜和重結(jié)晶等方法，分離得到14個化合物，經(jīng)理化常數(shù)和波譜學(xué)數(shù)據(jù)鑒定，并與文獻對照，鑒定出11個化合物，分別為偽蒲公英甾醇乙酸酯(I)、蒲公英賽醇乙酸酯(Ⅱ)、豆甾醇(Ⅲ)、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ(Ⅳ)、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ(V)、一桉葉醇(VI)、白術(shù)內(nèi)酯Ⅳ(Ⅶ)、一谷甾醇(Ⅷ)、胡蘿卜苷(IX)、葡萄糖(x)、蔗糖(

5、XI)，其中化合物I～Ⅲ為首次從該植物中分離得到[6]。多糖的提取方法很多，最常用的是加熱回流提取。此外，還有超聲強化提取，微波提取，堿提取法，酶解法提取等，本實驗采用了熱水提取后殘渣再用堿水提取的方法提取茅蒼術(shù)多糖[7]。2材料、儀器及試劑2.1材料茅蒼術(shù)采自江蘇茅山自然保護區(qū),為菊科植物茅蒼術(shù)Atractylodeslancea(Thunb)DC．的干燥根莖。2.2儀器UV-2102PCS型紫外分光光度計(尤尼柯上海儀器有限公司)SHB一111循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)ALRa冷凍干燥機(德國)R-200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(Buchi公司)METTLER

6、AE240分析天平（上海梅特勒一托利多儀器有限公司）HH系列數(shù)顯恒溫水浴鍋（江蘇金壇市醫(yī)療儀器廠）PHS-3C精密pH計（上海精密科學(xué)儀器有限公司）101-1型不銹鋼數(shù)顯電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海浦東榮豐科學(xué)儀器有限公司）H66MC超聲清洗機（無錫超聲儀器廠）2.3試劑乙醇，石油醚，葡萄糖，苯酚，濃硫酸及其它試劑均為分析純；雙蒸水(本實驗室自制)。3實驗方法3.1茅蒼術(shù)的預(yù)處理將茅蒼術(shù)根莖剪去須根，低溫干燥，粉碎，過40目篩。3.2茅蒼術(shù)的脫脂精密稱取干燥后過40目篩的茅蒼術(shù)粗粉100g，用石油醚5倍體積加熱回流4小時后趁熱抽濾，棄去萃取液，藥渣揮干石油醚后再加5倍體積的無

7、水乙醇加熱回流萃取4小時，除去萃取液。藥渣低溫（<10℃）干燥，脫脂后的茅蒼術(shù)供多糖提取用[8]。3.3茅蒼術(shù)粗多糖的提?。崴崛》ǎ⒚撝蟮乃幉姆勰┲糜?000mL單口圓底燒瓶中按設(shè)計的不同料液比加入蒸餾水，根據(jù)設(shè)計的不同溫度，于恒溫水浴中浸提，趁熱抽濾，提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至原液的1／5，緩緩加入95％的乙醇，使乙醇含量達80％(v／V)，于冰箱中靜置12h，可見大量的淺棕色沉淀析出，沉淀依次用無水乙醇，丙酮，乙醚淋洗,得疏松粉末后加適量水復(fù)溶，冷凍干燥約8小時，即得茅蒼術(shù)粗多糖。3.4茅蒼術(shù)多糖的純化采用三氯乙酸(TAC)法[9]脫除蛋白