茅蒼術(shù)多糖的分離純化及組成分析

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1、茅蒼術(shù)多糖的分離純化及組成分析作者：段國(guó)峰，歐陽(yáng)臻，余伯陽(yáng)【摘要】目的對(duì)茅蒼術(shù)多糖的提取、分離純化和單糖的組成進(jìn)行了分析。方法茅蒼術(shù)經(jīng)熱水提取乙醇沉淀得多糖粗品(APan，Glu，Gal組成，其摩爾比為0.16：0.17：0.24：0.55：0.89：1.00；APan，Gal組成，其摩爾比為0.82：1.00：0.32；APan，Gal組成，其摩爾比分別為0.24：1.00：0.48：0.53及0.22：0.34：1.00：0.58；為茅蒼術(shù)多糖的進(jìn)一步研究提供了基礎(chǔ)?！娟P(guān)鍵詞】茅蒼術(shù)；多糖；分子量；組分　　Abstract：Objective

2、TopurifyandanalysethepolysaccharidesfromrhizomesofAtractylodeslanceaDC.MethodsThecrudepolysaccharides(APolecularan公司）、SephadexG-100、分子量標(biāo)準(zhǔn)品葡聚糖Dextran系列、單糖標(biāo)準(zhǔn)品（Sigma公司），其他化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純?！　?.2儀器　　JASCOLC1500高效液相色譜系統(tǒng)，日本分光公司；TSK-G4000Pl蒸餾水，90℃提取4次，合并提取液，減壓濃縮至一定體積。冰浴條件下加三氯乙酸脫蛋白，離心除去變性蛋

3、白，上清液迅速用NaOH中和至pH=7.0，濃縮至適量，透析除去小分子雜質(zhì)，再減壓濃縮，加4倍體積的95%乙醇，4℃放置過(guò)夜，離心收集沉淀，沉淀依次用無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，揮干乙醚后，復(fù)溶于水，冷凍干燥。即得水提粗多糖AP×2.6cm）析層析，依次用0.00～2.00mol/L的NaCl溶液洗脫，分別收集洗脫液（每管10ml），以改良的苯酚硫酸法［7］跟蹤檢測(cè)，根據(jù)洗脫曲線收集。取0.02～0.20mol/L的NaCl溶液洗脫部分，蒸餾水透析3d，冷凍干燥，再經(jīng)SephadexG-100柱層析（60cm×1.0cm）層析，0.1mol/LN

4、aCl洗脫，以改良的苯酚硫酸法跟蹤測(cè)定，根據(jù)洗脫曲線收集，并經(jīng)HPLC凝膠柱檢測(cè)，得到較為純化的茅蒼術(shù)多糖APol/L醋酸鈉，流速為0.5ml/min?！　?.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作分別稱取平均分子量為2000,500,70,40,10kDal的Dextran系列標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖5.0mg，用1ml流動(dòng)相溶解，0.45μm濾膜過(guò)濾后,吸取20μl注入高效液相色譜中，以分子量的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo),以各糖的保留時(shí)間為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。　　2.3.2樣品分子量測(cè)定取純化后的樣品各5mg與1ml流動(dòng)相溶解，按與Dextran標(biāo)準(zhǔn)品相同的色譜條件操作，求得各自相應(yīng)

5、的保留時(shí)間，按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算分子量?！　?.4茅蒼術(shù)多糖組成單糖的組分分析　　2.4.1紅外色譜分析分別稱多糖各1mg干燥樣品，與KBr研磨混合后壓片，采用Avatar360紅外光譜儀掃描分析，波長(zhǎng)范圍為4000～400cm-1，尤其觀察800～900cm-1的吸收峰?！　?.4.2多糖的水解取APg干燥樣品，加入2.0mol/L的H2SO4溶液0.5ml，封管，100℃水解12h，取出，加入BaCO3中和，3000r/min離心除去BaSO4沉淀，上清液冷凍干燥，供分析用。　　2.4.3薄層色譜分析分別稱?。酞彩罄钐?、Ｄ阿拉伯糖、Ｄ甘露糖、Ｄ

6、葡萄糖、Ｄ半乳糖和D木糖各15mg，分別定容于10ml容量瓶中，得各單糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液。另取各單糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液1ml等量混合，得單糖標(biāo)準(zhǔn)品混合溶液。取單糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液和混合單糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別點(diǎn)于含0.3mol/L的磷酸二氫鈉的硅膠G板上，以丙酮∶水=24∶1及正丁醇∶醋酸乙酯∶異丙醇∶醋酸∶水∶吡啶=7∶20∶12∶7∶6∶7進(jìn)行二次展開(kāi)，取出，晾干后，噴苯胺-鄰苯二甲酸顯色,計(jì)算Rf值。樣品APg，加入鹽酸羥胺10mg，內(nèi)標(biāo)肌醇7mg和吡啶0.5ml，于90℃水浴加熱30min并振蕩，取出冷卻至室溫，加入醋酸酐0.5ml，在90℃繼續(xù)加熱30m

7、in進(jìn)行乙?；?，產(chǎn)物濃縮至干，加入0.5ml氯仿溶解，溶液經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾后，注入氣相色譜儀進(jìn)行分析。色譜條件：DB-530000mm×0.53mm彈性石英毛細(xì)管色譜柱；載氣：高純氮?dú)?；檢測(cè)器：氫火焰離子化檢測(cè)器(FID)；程序升溫：100℃（5℃/min）→190℃，190℃（4℃/min）→240℃（5min）；汽化溫度280℃；檢測(cè)器260℃?！　?結(jié)果　　3.1茅蒼術(shù)多糖的提取純化茅蒼術(shù)粉末經(jīng)脫脂、水提、脫蛋白、醇沉，冷凍干燥后得到APin，代入回歸方程得平均分子量分別約為：5.3×103，5.4×104，7.0×105，2.0×1

8、06?！　?.3茅蒼術(shù)多糖APan，Glu，Gal組成，APan，Gal組成；APan，Gal組成?！　?.3.3氣相色譜分析結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)單