igfbp-3與惡性膠質(zhì)瘤的相關(guān)分析

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1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文IGFBP--3與惡性膠質(zhì)瘤的相關(guān)分析姓名：陳澤申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：扈玉華201203中文摘要IGFBP．3與惡性膠質(zhì)瘤的相關(guān)性分析摘要目的：腦膠質(zhì)瘤是最常見的顱內(nèi)惡性腫瘤，約占全部顱腦腫瘤的40．50％左右。按照2000年WHO標(biāo)準病理分級標(biāo)準可以劃分為毛細胞型星形膠質(zhì)瘤(I級)、擴散型星形膠質(zhì)瘤(II級)、間變型星形膠質(zhì)瘤(III級)和膠質(zhì)母細胞瘤(IV級)。據(jù)文獻報道，中國的腦膠質(zhì)瘤年發(fā)病率一般為3-6人／10萬人，而且呈現(xiàn)一種逐年遞增的趨勢，年增長率約為1．2％，至今仍是全身腫瘤中預(yù)后最差

2、的腫瘤之一。因此，研究腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及復(fù)發(fā)的機制，開發(fā)新型抗腫瘤藥物，減輕腦腫瘤對人類生命的威脅，是一個重要的研究課題。IGFBP．3是IGFBPs家族成員之一，是血液中IGF主要的結(jié)合蛋白，可以結(jié)合并運輸IGF．I，調(diào)節(jié)其活性，從而在細胞生長方面發(fā)揮著重要的作用。最近體外研究表明IGFBP．3作為腫瘤細胞存活行為的一個重要調(diào)節(jié)者可以通過非依賴IGF機制發(fā)揮作用。細胞內(nèi)多種信號通路如胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERR)、核轉(zhuǎn)錄因子心(Nuclearfactor．kappab，NF．KB)、Smad2／3等參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及復(fù)發(fā)的

3、調(diào)節(jié)，尤其是ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在調(diào)節(jié)腦膠質(zhì)瘤細胞增殖、存活和凋亡過程中發(fā)揮極其重要的作用。而IGFBP．3可以抑制ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活發(fā)揮促凋亡抗增殖的功能，但是具體作用還未做過詳細闡釋。本研究通過免疫組織化學(xué)染色方法以及Q．PCR方法檢測IGFBP．3在惡性膠質(zhì)瘤中的表達情況，闡釋IGFBP。3調(diào)控惡性膠質(zhì)瘤細胞凋亡的分子機制，充實和完善IGFBP。3非依賴IGF．I方式即通過對ERK信號通路的影響抑制細胞增殖和促進細胞凋亡的理論，揭示惡性膠質(zhì)瘤復(fù)發(fā)的機理，發(fā)現(xiàn)調(diào)控惡性膠質(zhì)瘤細胞凋亡的新靶點，為臨床治療惡性膠質(zhì)瘤提供新的思路和方法。方

4、法：l臨床標(biāo)本的采集：采集河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院近三年病理分級為II．Ⅳ級的腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本34例(病理分級依據(jù)WH02000分級標(biāo)準)，其中II級星形細胞膠質(zhì)瘤標(biāo)本11例，III級星形細胞膠質(zhì)瘤標(biāo)本14例，IV級星形中文摘要細胞膠質(zhì)瘤標(biāo)本9例，同時取正常腦組織標(biāo)本16例(對照用)。2臨床標(biāo)本的檢測與分析：運用免疫組化方法從蛋白水平檢測IGFBP．3在各級膠質(zhì)瘤和正常組織中的表達情況。采用Q．PCR方法從mRNA水平定量檢測IGFBP．3在各級膠質(zhì)瘤和正常組織中的表達情況。3數(shù)據(jù)分析：應(yīng)用spssl7．0統(tǒng)計學(xué)軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果：

5、1將經(jīng)過4％多聚甲醛溶液固定的腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本以及正常腦組織標(biāo)本經(jīng)過免疫組織化學(xué)方法進行分析，IGFBP．3在細胞中表達后，陽性細胞呈現(xiàn)棕色。應(yīng)用spssl7．0進行統(tǒng)計分析結(jié)果顯示，IGFBP．3在腦膠質(zhì)瘤中的表達水平均高于正常腦組織，這種差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P值小于O．05。在各個級別的膠質(zhì)瘤中，IGFBP．3的表達存在差異，且P值小于O．05，這種差異有統(tǒng)計學(xué)意義。上述結(jié)果從蛋白水平說明了IGFBP．3在腦膠質(zhì)瘤中的表達同正常腦組織存在差異，這種差異并且隨著膠質(zhì)瘤的病理級別升高不斷增大。2應(yīng)用RNA提取試劑盒分別提取實驗組膠質(zhì)瘤細胞和正常腦

6、組織細胞中的總RNA，紫外分光光度法測定RNA濃度(A260／A280>1．8)，用l％瓊脂糖凝膠電泳(含EB0．5mg／L)，觀察到28s和18sRNA兩條清晰帶。應(yīng)用Q．PCR技術(shù)將IGFBP．3作為目的基因進行擴增，并且應(yīng)用帶熒光的擴增酶MaximarMSYBRGreen／ROXqPCRMasterMix(2x)對其進行標(biāo)記。應(yīng)用spssl7．0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果顯示，IGFBP．3在膠質(zhì)瘤細胞組中的表達較之正常腦組織組明顯升高，且這種差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，P值均小于O．05；組間比較顯示在II、III、IV級星型膠質(zhì)瘤細胞中

7、IGFBP．3的表達呈現(xiàn)遞增趨勢，且P值均小于O．05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。上述研究結(jié)果從基因水平說明了IGFBP．3在腦膠質(zhì)瘤中的表達水平較正常腦組織明顯升高，且隨著膠質(zhì)瘤的惡性進展逐漸遞增。結(jié)論：1IGFBP．3在惡性膠質(zhì)瘤中的表達水平與正常腦組織相比明顯升高。2IGFBP．3的表達水平在不同級別腦膠質(zhì)瘤中存在差異，且隨惡性膠質(zhì)瘤級別的增高呈現(xiàn)遞增趨勢，與病情進展密切相關(guān)。3IGFBP．3可以通過依賴以及非依賴IGF的方式發(fā)揮作用，能夠抑制ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活，促進腫瘤細胞凋亡，抑制細胞增殖，能夠為臨床治中文摘要療膠質(zhì)瘤提供新靶點和新

8、思路。關(guān)鍵詞：腦膠質(zhì)瘤；IGFBP．3；IGF；IGF．IR；ERK信號通路；腫瘤細胞凋亡‘英文摘要一——————————————————————————————————————