大鼠觸液核降鈣素基因相關(guān)肽的分布及其在內(nèi)臟痛中的作用

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1、徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文大鼠觸液核降鈣素基因相關(guān)肽的分布及其在內(nèi)臟痛中的作用姓名：王家友申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：麻醉學(xué)指導(dǎo)教師：張礪團(tuán)2012-04徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文大鼠觸液核降鈣素基因相關(guān)肽的分布及在內(nèi)臟痛中的作用中文摘要目的1．觀察正常大鼠觸液核(cerebrospinalfluid—contactingnucleus，CSF—CN)降鈣素基因相關(guān)肽(calcitoningene-relatedpeptide，CGRP)的分布。2．內(nèi)臟痛大鼠觸液核CGRP的變化。3．通過外源性的CGRP和CGRP受體拮抗

2、劑CGI沖8—37注入大鼠觸液核進(jìn)一步探究CGRP對內(nèi)臟痛調(diào)控中的作用。方法實驗用Sprague-Dawley大鼠，分組如下：1．SD大鼠，正常組(n=8)，大鼠處死前48h側(cè)腦室注射霍亂毒素B亞單位(choleratoxinB，CB)逆行追蹤定位CSF．CN，采用免疫熒光雙標(biāo)確定在觸液核有無CGRP的分布；2．內(nèi)臟痛模型分兩組：直結(jié)腸擴(kuò)張組(noxiousphasiccolorectaldistension，CRD)，傷害性直結(jié)腸擴(kuò)張(80mmHg)模擬內(nèi)臟高敏性(visceralhypersensitivi

3、ty，VH)模型和對照組：非傷害性直結(jié)腸擴(kuò)張(20mrnHg)。通過行為學(xué)和肌電分析分別觀察了腹壁回撤反射評分(abdominalwithdrawalreflex，AWR)和腹壁外斜肌放電幅度(electromyographicactivity，EMG)。采用側(cè)腦室注射霍亂毒素B亞單位(choleratoxinB)追蹤定位CSF—CN，免疫熒光雙標(biāo)探索對照組大鼠CSF．CN和模型大鼠CSF—CN中CGRP在不同時間的分布變化；蛋白質(zhì)免疫印記定量標(biāo)記CGRP含量的變化趨勢；大鼠痛閾和腹肌放電幅度變化與觸液核中CG

4、RP變化趨勢的相關(guān)性；3．探討了外源性的CGRP和CGRP受體拮抗劑，CGRP8．37注入SD大鼠的CSF．CN上，對大鼠內(nèi)臟痛行為學(xué)的變化，腹壁外斜肌放電幅度變化的影響。采用，徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文Image-ProPlus6．0圖像軟件對CGRP陽性神經(jīng)元進(jìn)行計數(shù)和采用Photoshop5．0對免疫印記條帶進(jìn)行分析。結(jié)果1．正常大鼠CB免疫陽性物質(zhì)的分布CB免疫陽性物質(zhì)規(guī)律而集中地分布在中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)腹側(cè)部，而CGRP免疫陽性物質(zhì)散在分布，部分CB免疫陽性神經(jīng)細(xì)胞胞質(zhì)中共表達(dá)CGRP免疫陽性物質(zhì)，一些非

5、CB陽性神經(jīng)細(xì)胞的胞質(zhì)中也存在CGRP陽性物質(zhì)。2．內(nèi)臟痛模型的行為學(xué)和實驗室結(jié)果CRD組大鼠痛閾和對照組大鼠痛閾比較顯示，CPd)組大鼠痛閾有降低的趨勢，模型第3天，CRD組大鼠的疼痛閾值較對照組大鼠降低明顯，對照組大鼠痛閾(34．0±1．3)mmHg，CRD組大鼠是(31．3±2．3)mmHg(F=77，P<0．05)。模型組腹外斜肌放電幅度和對照組相比較，有明顯增高趨勢，在第3天(F=13．66，P

6、胞數(shù)沒有變化，但CSF—CN的CGRP免疫陽性物質(zhì)表達(dá)的神經(jīng)細(xì)胞數(shù)逐漸增加。內(nèi)臟痛后第5天CGRP陽性神經(jīng)元數(shù)目明顯增加，模型組(4764-5)，對照組(2904-5)，和對照組相比有統(tǒng)計學(xué)意義(F=953．66，P

7、痛行為學(xué)的變化有劑量依賴性，O．13nmol和0．26nmol的CGRP,可導(dǎo)致AWR評分明顯降低(氏o．05)和腹外斜肌EMG放電幅度也減少伊<0．05)，0．026nmol的CGRP對AWR和腹外斜肌放電幅度沒有明顯影響(P>o．05)。隨著CGRP齊IJ量的增加，AWR評分和EMG放電幅度減少越顯著(尸<0．05)。CGRP受體拮抗劑，CGRP8—37能逆轉(zhuǎn)CGI沖引起的行為學(xué)的變化(尸<0．05)。CGRP8．37的劑量越大，拮抗效果越顯著。結(jié)論1．『F常大鼠CSF．CN有CGRP的分布。徐州醫(yī)學(xué)院碩士

8、學(xué)位論文2．大鼠CSF-CN中CGI沖可能參與腦干水平內(nèi)臟疼痛的中樞調(diào)控。3．CSF—CN中CG心，對內(nèi)臟痛可能具有中樞抑制作用。關(guān)鍵詞降鈣素基因相關(guān)肽；觸液核；直結(jié)腸擴(kuò)張；中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)；內(nèi)臟痛本課題受2009年國家自然科學(xué)基金資助(基金號：30871307)徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文TheEffectsofCalcitoninGene—relatedPeptideinCerebro