正常大鼠觸液核trpa1的分布及其在神經(jīng)病理性痛條件下的表達(dá)

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1、徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文正常大鼠觸液核TRPA1的分布及其在神經(jīng)病理性痛條件下的表達(dá)姓名：祖翠華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：麻醉學(xué)指導(dǎo)教師：張勵(lì)才2012-04徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文正常大鼠觸液核中T砌)A1的分布及其在神經(jīng)病理性痛條件下的表達(dá)中文摘要目的觀察正常大鼠觸液核內(nèi)TRPAl的分布及其在神經(jīng)病理疼痛過(guò)程中的表達(dá)變化，探討觸液核的功能及神經(jīng)病理性疼痛形成的可能機(jī)制。方法一、雄性SD大鼠(250±50曲6只，大鼠處死前48h側(cè)腦室引入CB-HRP追蹤定位觸液神經(jīng)元，應(yīng)用免疫熒光化學(xué)雙重標(biāo)記技術(shù)與激光共聚焦顯微鏡技術(shù)相結(jié)合，檢測(cè)TRPAl在正常大鼠觸液核的分布。二、雄性SD大鼠(25

2、0±509)隨機(jī)分為神經(jīng)病理性痛組(cCI組)，假手術(shù)組(Sham組)。(1)行為學(xué)測(cè)定(n=8)：應(yīng)用電子VonFrey觸痛儀和熱輻射刺激儀測(cè)定機(jī)械縮足閾值(MWT)和熱縮足潛伏期(TWL)作為行為學(xué)觀察指標(biāo)。以觀察疼痛隨時(shí)程的變化。(2)觀察各神經(jīng)病理性疼痛各時(shí)間點(diǎn)TRPAl在觸液核中的表達(dá)變化：復(fù)制神經(jīng)病理性痛組及假手術(shù)組模型，每組又隨機(jī)分為第O天組，第1天組，第3天組，第5天組，第7天組，第10天組和第14天組七個(gè)亞組(n=6)。各組動(dòng)物處歹日前48小時(shí)側(cè)腦室注射cB—HRP以標(biāo)記觸液神經(jīng)元，取觸液核所在段腦組織，冰冽切片，做CB．HRP瓜PAl免疫熒光雙標(biāo)反應(yīng)。用激光共聚

3、焦顯微鏡技術(shù)觀測(cè)比較TRPAl隨神經(jīng)病理性疼痛時(shí)程變化在大鼠觸液核中的表達(dá)變化。結(jié)果一、免疫熒光圖片顯示觸液核主要存在于中腦導(dǎo)水管腹側(cè)中線腦實(shí)質(zhì)內(nèi)和橋腦上段第四腦室的灰質(zhì)內(nèi)?！篎常條件下，觸液核內(nèi)見(jiàn)有CB—I‘IRP／TRPAl受體陽(yáng)性雙重標(biāo)汜細(xì)胞，計(jì)數(shù)為249±19。二、行為學(xué)表現(xiàn)徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文Sham組術(shù)自，J．與術(shù)后TwL與MwT數(shù)值均無(wú)顯著性差異(易0．05)。CCI組第0天，第l天，第3天，第5天，第7天，第10天和第14天的TWL與MwT值分別為(15．64±1．62，55．95±6．82)、(15．17±3．03，54．71±5．46)、(12．46±2．27

4、，42．29±5．84)、(10．40±2．55，33．89±4。66)、(6．13±1．33，19。38±3．81)、(9．67±1．42，30．40±4．34)、(12．09±2．47，38．93±5．46)。CCI組第0天、第l天與Sham組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(乃0．05)，CCI組第3、5、7、10、14天MWT與TWL值與Sham組比較降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。CCI組第l天MWT與TWL值與第0天比較無(wú)明顯差異(侈0．05)，第3、5、7、10、14天MWT與TWL值與第0天比較，低于第O天∽

5、熒光各組大鼠免疫熒光圖片均顯示TRPAl(綠色)、CB—HRP(紅色)和CB．HRP廠rRPAl(黃色)免疫陽(yáng)性細(xì)胞。CCI組與Sham組CB．HRP標(biāo)記陽(yáng)性神經(jīng)元，組間無(wú)明顯差異(P>0．05)。Sh鋤組術(shù)前與術(shù)后CB．HRP瓜PAl雙標(biāo)神經(jīng)元數(shù)目無(wú)明顯差異儼>O．05)。CCI第0天，第1天，第3天，第5天，第7天，第10天和第14天的CB．HRP廠rRPAl雙標(biāo)神經(jīng)元數(shù)目分別為(241±11)、(246±12)、(385±16)、(501±20)、(596±29)、(493±17)和(383±18)。CCI組第0天、第1天CB．HRP凰PAl雙標(biāo)神經(jīng)元數(shù)與Sham組比較，差異

6、無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0．05)，CCI組第3、5、7、10和14天五個(gè)時(shí)間點(diǎn)CB．HRP廠rRPAl雙標(biāo)神經(jīng)元數(shù)與Sham組比較及與差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．01)。CCI組第1天大鼠CB—HRP／TRPAl雙標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)與0天比較無(wú)差異性護(hù)>0．05)，第3、5、7、10、14天與0天比較增多(P<0．01)，自第3天開(kāi)始增多，至第7天所有CB．HRP陽(yáng)性細(xì)胞均與TRPAl共表達(dá)，至第10天CB．HRP廠rRPAl雙標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)有所下降。結(jié)論一、正常大鼠觸液神經(jīng)核團(tuán)內(nèi)存在TRPAl。二、確定神經(jīng)病理性疼痛模型建立成功；大鼠腦實(shí)質(zhì)的特定部位恒定存在觸液核團(tuán)；神經(jīng)病理性疼痛條件下，觸

7、液核TRPAl表達(dá)增多，并與神經(jīng)病理性痛3重要作用。關(guān)鍵詞遠(yuǎn)位觸液神經(jīng)元；觸液核；TRPAl；神經(jīng)病理性疼痛本課題受2009年國(guó)家自然科學(xué)基金資助(基金號(hào)：30871307)4ExpressionofTRPAlinCSF-ContactingNucleusofRatBrainParenchymainNeuropathicPainAbstractObjectiveTbobseⅣetheexpressionofTRPAlinCSF-ContactingNucleusofn