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《血管內(nèi)皮生長因子對誘導多能干細胞向心肌細胞分化的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、重慶醫(yī)科大學碩士學位論文血管內(nèi)皮生長因子對誘導多能干細胞向心肌細胞分化的影響姓名：趙霞申請學位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學指導教師：張曉剛201205血管內(nèi)皮生長因子對誘導多能干細胞向心肌細胞分化的影響摘要目的觀察血管內(nèi)皮生長因子(vEGF)對小鼠誘導多能干細胞(觚PSc)向心肌細胞分化的影響。方法在白血病抑制因子(LIF)和成纖維細胞存在的條件下培養(yǎng)小鼠iPSc，從小鼠iPSc的鏡下形態(tài)特征，干細胞基因Oct一4的表達及iPSc的堿性磷酸酶染色方面鑒定iPSc。并采用懸滴培養(yǎng)法啟動iPSc分化，分別以10ng／“、20ng／ml、50ng／m
2、1的VEGF作為誘導劑對小鼠iPSc誘導分化，以自然分化作為陰性對照組，以加入1％二甲亞砜(DMSO)誘導劑作為陽性對照組。每天在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，記錄各組跳動的擬胚體(EBs)出現(xiàn)的具體時間及每天跳動的擬胚體的數(shù)目，進一步計算心肌細胞分化率。PT-PCR檢測分化過程中心肌發(fā)育基因a—MHC和13．MHCI出NA的表達，細胞免疫熒光檢測iPSc分化細胞cTnT的表達。結(jié)果1．在LIF和成纖維細胞存在的條件下，iPSc呈集落樣或巢狀生長且不斷增殖；熒光顯微鏡下小鼠iPSc呈綠色熒光(Oct一4啟動)，堿性磷酸酶染色提示iPSc細
3、胞團著紫黑色。2．各分化組均可在光鏡下見白發(fā)搏動的EBs，與自然分化組相比，三個濃度組的VEGF均可提高iPSc的心肌細胞分化率(PO．05)。3．各分化組分化而來的細胞均表達調(diào)控心肌發(fā)育的基因a—MHC和13-MHC；VEGF可上調(diào)a—MHC和13．MHC的表達，VEGF濃度為20ng／ml時，其上調(diào)作用最為明顯(P<0．05)。4．
4、各分化組分化而來的心肌細胞可白發(fā)搏動，同時表達心肌特異蛋白cTnT。結(jié)論1．在LIF和成纖維細胞的環(huán)境中，小鼠iPsc保持未分化狀態(tài)，去除這兩者后，小鼠iPSc可以通過形成擬胚體開始分化。2．一定濃度的外源性的VEGF可以促進誘導多能干細胞向心肌細胞的分化。關鍵詞血管內(nèi)皮生長因子；小鼠誘導多能干細胞；分化；心肌細胞THEEFFECToFVASCULARENDOTHELIALGRoWTHEACToRoNDIFFERENTIATIONOFMOUSEINDUCEDPLURIPOTENTSTEMCELLSINToCARDIoTⅥYOCYTESAB
5、STRACTobjectiVeT0observethce虢ctofVascularendothelialgrowthfacto“VEGF)ondi婦FeremiationofmouseiIlducedpluripotentstemcells(iPScells)intocardioInyoc”es．MethodsMouseiPScellswereculturedonnlouseemb巧oIlic助roblast(MEF)withmediumcontainingleukemiainllibito叫factor(LIF)．Undi任．erent
6、iatedmouseiPScellswereidentifiedbytheirmo印hologyunderIIlicroscope，expressionofgreennllorescentprotein(GFP)promotedbystemceUgenes0ct一4andalkalinephosphatasestaillillg．Hangingdropmethodwasusedtomal(eiPScellsdi歸融rentiate．1On∥m1，20ng／ml，50n∥mlVEGFwererespectiVelyaddedtoinduce
7、thedi自鳧relltiationofiPSceUs．Naturaldi虢rentiationwithoutanyiIlducerwasnegativegroupand1％dimethylsulf．oxide(DMSO)wasaddedaspositivecon旺ol黟oup．Cellswereobservedunder血croscope，thetimeofbeatillgembWonicbodies(EBs)appearedandnumbersineachgroupwererecordedandmedia、erentiationrat
8、eofInyocardialcellswascalculated．Theexpressionof僅一MHCandp—MHCmRNAindi婦睹rentiatedcellsweredetecte
