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《microrna-545抑制肺癌細(xì)胞增殖機(jī)制》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)博士學(xué)位論文MicroRNA．545抑制肺癌細(xì)胞增殖機(jī)制作者姓名：學(xué)科專業(yè)：導(dǎo)師姓名：完成時(shí)間：杜博文生物化學(xué)與分子生物學(xué)張必良教授二O一四年二月UniversityofScienceandTechnologyofChinaAdissertationfordoctor’SdegreeMechanismofmicroRNA．．545inhibitinglungcancercelproliferationAuthor’SName：BowenDUspeciality：biochemistryandmolecularbiolog
2、ySupervisor：Prof．BiliangZhangFinishedtime：February，2014中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的成果。除己特另IJ)jD以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含任何他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說明。作者簽名：簽字日期：塑[竺：；．Z中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)學(xué)位論文授權(quán)使用聲明作為申請(qǐng)學(xué)位的條件之一，學(xué)位論文著作權(quán)擁有者授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)擁有學(xué)位論文的部分使用權(quán)，即：學(xué)校有權(quán)按有
3、關(guān)規(guī)定向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以將學(xué)位論文編入《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》等有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。本人提交的電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。保密的學(xué)位論文在解密后也遵守此規(guī)定。u百公開口保密(——年)作者簽名：絲I星爻簽字日期：塵[肇。；。二7導(dǎo)師簽名：簽字日期：2力f嗶．弓，]．摘要微小RNA(miRNAs)是一類大約22個(gè)堿基長(zhǎng)的非編碼RNA。miRNA通過與mRNA的3’UTR結(jié)合類抑制mRNA翻譯或造成mRNA降解。越來越多的研
4、究已經(jīng)證明miRNA參與細(xì)胞的增殖，分化和凋亡等生物過程。因此miRNA的異常表達(dá)與癌癥有關(guān)。肺癌是目前致死率最高的癌癥，越來越多的報(bào)道證明腫瘤的發(fā)生和發(fā)展與miRNA相關(guān)，考慮到人基因組中存在許多miRNA，我們決定在肺癌病人的腫瘤組織和正常非組織中檢測(cè)miRNA表達(dá)譜。我們發(fā)現(xiàn)共有31個(gè)miRNA呈低表達(dá)。為了進(jìn)一步確認(rèn)這些miRNA在肺癌細(xì)胞增殖中的作用，我們進(jìn)行了第二輪篩選，將這些miRNA轉(zhuǎn)染肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和H460，我們發(fā)現(xiàn)miR-545能夠顯著地抑制A549和H460細(xì)胞增殖。于是我們研究miR．545抑制細(xì)胞增殖的機(jī)
5、制。我們同過EdU摻入實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)miR-545能夠抑制細(xì)胞DNA合成。因此我們認(rèn)為miR．545有可能影響細(xì)胞周期。我們通過細(xì)胞周期檢測(cè)發(fā)現(xiàn)miR．545能夠引起細(xì)胞周期阻滯在G0／GI期。此外，我們還發(fā)現(xiàn)miR-545在A549細(xì)胞中能夠促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。進(jìn)而我們研究了miR-545造成細(xì)胞周期阻滯的機(jī)制。我們使用targetscan預(yù)測(cè)miR．545靶基因，發(fā)現(xiàn)與細(xì)胞周期相關(guān)的cyclinD1和CDK4是miR．545的靶基因。我們發(fā)現(xiàn)miR-545能在A549和H460細(xì)胞系中抑制cyclinD1和CDK4的翻譯，而在HFLl細(xì)胞系中
6、，抑制miR．545可以促進(jìn)cyclinDI和CDK4表達(dá)。另外雙報(bào)告實(shí)驗(yàn)表明miR．545通過結(jié)合cyclinD1和CDK4的3’UTR來抑制這兩個(gè)基因的翻譯。這說明cyclinDI和CDK4是miR．545的靶基因。另外我們通過siRNA抑制cyclinD1和CDK4，引起細(xì)胞增殖抑制，細(xì)胞周期阻滯在G1期，并造成細(xì)胞凋亡。這說明miR-545是通過抑制cyclinD1和CDK4的表達(dá)來抑制細(xì)胞增殖的。另外我們還發(fā)現(xiàn)miR．545基因的啟動(dòng)子區(qū)域含有CpG島，這意味著miR．545的表達(dá)有可能受到啟動(dòng)子甲基化的調(diào)控，但是我們后續(xù)的實(shí)
7、驗(yàn)未證明miR-545表達(dá)受啟動(dòng)子甲基化調(diào)控。關(guān)鍵詞：肺癌，miR-545，細(xì)胞周期阻滯，cyclinD1，CDK4AbstractABSTRACTMicroRNAs(miRNAs)areaclassofsmallnoncodingRNAofabout22ntlong．MiRNAscaninhibitmRNAtranslationorcausemRNAdegradationbybindingwiththeir3’UTR．AnincreasingnumberofstudieshaveshownthatmiRNAsareinvolvedin
8、biologicalprocesssuchascellproliferation，differentiationandapoptosis；thereforeaberrantexpressionofmiRNA
