egcg抑制肺癌細(xì)胞增殖及其機(jī)制的研究論文

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1、EGCG抑制肺癌細(xì)胞增殖及其機(jī)制的研究論文孫輯凱黃立軍常東勝【Abstract】AIM:Toexploretheeffectofepigallocatechin3gallate(EGCG)ontheproliferationoflungcancercellsanditsmechanism.METHODS:HumanlungcancercelllineA549RNAandproteing/LEGCG(P0.01).Theexpressionofsurviving/LEGCG.CONCLUSION:EGCGcaninhibitthegroanlungcancercel

2、lsandinducecellapoptosis.Itsmechanismmaybeassociateds;survivin;apoptosis【摘要】目的：研究表沒食子兒茶素3沒食子酸酯(EGCG)對(duì)人肺癌細(xì)胞增殖的影響及機(jī)制.方法：培養(yǎng)肺癌細(xì)胞A549，加入EGCG制作細(xì)胞抑制曲線；EGCG作用于人肺癌A549細(xì)胞株前后通過(guò)Hoechst染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡.RTPCR及EM培養(yǎng)基(含100mL/L小牛血清,10萬(wàn)U/L青霉素,10萬(wàn)U/L鏈霉素),在37℃50mL/LCO2培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng).EGCG以無(wú)血清DMEM培養(yǎng)基稀釋凍存于-20℃.1.2方法1.2.1

3、細(xì)胞毒試驗(yàn)(MTT法)將常規(guī)培養(yǎng)的A549細(xì)胞用胰蛋白酶消化后制成1×105/L的單細(xì)胞懸液，加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中每孔0.2mL，培養(yǎng)24h后，換含不同濃度的EGCG培養(yǎng)液，每濃度設(shè)6復(fù)孔.freelin后，酶標(biāo)儀測(cè)定各孔的吸光度值(A490nm),按下式計(jì)算各用藥組的生長(zhǎng)抑制率IR(%):生長(zhǎng)抑制率IR(%)=(1-用藥組平均A490nm/對(duì)照組A490nm)×100%.1.2.2Hoechst染色EGCG處理48h后的肺癌細(xì)胞與對(duì)照組細(xì)胞制作細(xì)胞爬片，用PBS洗3次，40g/L多聚甲醛固定30min，PBS洗3次.吸棄PBS，加入0.5mLHoechst染色液，

4、染色10min,染色時(shí)搖動(dòng)數(shù)次.之后吸棄染色液，加一滴抗淬滅液于載玻片上，細(xì)胞面朝下輕輕放在載玻片液滴上，熒光顯微鏡下觀察凋亡.1.2.3survivinRTPCR將EGCG處理48h后的肺癌細(xì)胞與對(duì)照組細(xì)胞以TRIZOLReagent提取總RNA，紫外分光光度計(jì)準(zhǔn)確定量，相同條件下進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄survivin上游引物P1:5′CGGAATTCATGGGTGCCCCGACGTTG3′；下游引物P2;5′CGGGATCCTCAATCCATGGCAGCCAGC3′.預(yù)計(jì)片段為420bp同時(shí)以人βactin為內(nèi)參照.βactin的引物序列為：P1：5′TGGG

5、CATGGGTCAGAAGGGATTC3′;P2:5′ATGTCACGCACGCACGATTTCCCG3′，預(yù)計(jì)片段為502bp.PCR條件以94℃變性5min后，按下述參數(shù)循環(huán)25次：94℃變性15s，57℃退火40s，72℃延伸1min.1.2.4：DNAmarker；1：對(duì)照細(xì)胞組；2：EGCG60mg/L作用48h.圖3EGCG作用后A549細(xì)胞中survivin的RTPCR檢測(cè)（略）2.4TT法體外觀察不同濃度茶多酚(I)對(duì)人肺癌細(xì)胞株(PG)細(xì)胞的殺傷作用，結(jié)果顯示I可明顯抑制PG細(xì)胞表面CD44，CD54的表達(dá).I對(duì)PG細(xì)胞和靜息血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏

6、附性也具有明顯的抑制作用，并可抑制黏附分子C7344，CD54的表達(dá)，呈劑量依賴關(guān)系.I的抗黏附作用可能與其抗腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān).Banerjee等［6］發(fā)現(xiàn)茶多酚可以通過(guò)抑制Cox2，誘導(dǎo)caspase3表達(dá)抑制肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng).本研究通過(guò)細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)（MTT）發(fā)現(xiàn)EGCG很小濃度就能抑制A549細(xì)胞的生長(zhǎng)，Hoechst染色后，發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞經(jīng)60mg/LEGCG處理后部分染色質(zhì)固縮，在熒光顯微鏡下，呈現(xiàn)出致密濃染或碎塊狀濃染，說(shuō)明凋亡細(xì)胞大量增加.凋亡率明顯高于對(duì)照組.survivin在許多肺癌組織中表達(dá)，是迄今發(fā)現(xiàn)的作用最強(qiáng)的凋亡抑制因子［7］.本研究通過(guò)olecula

7、rtargetsforthecancerpreventiveactivityofteapolyphenols［J］.MolCarcinog,2006,45(6):431-435.［2］AhmadN,GuptaS,MukhtarH.Greenteapolyphenolepigallocatechin3gallatedifferentiallymodulatesnuclearfactorkappaBincancercellsversusnormalcells［J］.ArchBiochemBiophys,2000,376(2):338-346.［3］盛