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《柑桔srap和issr分子標記技術體系的建立與優(yōu)化》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、分子植物育種，2008年，第6卷，第1期，第170-176頁MolecularPlantBreeding,2008,Vol.6,No.1,170-176新思路、新技術、新方法NovelThinking&Technology柑桔SRAP和ISSR分子標記技術體系的建立與優(yōu)化吳鑫1,2,3雷天剛2,3何永睿2,3劉小豐2,3許蘭珍2,3彭愛紅2,3陳善春2,3*1西南大學園藝園林學院,重慶,400716;2西南大學柑桔研究所,重慶,400712;3國家柑桔品種改良中心,重慶,400712*通訊作者,s
2、cchen2004@vip.sina.com摘要通過對PCR反應程序、反應體系(DNA模板量、PCR反應體積、Mg2+濃度、dNTP濃度、Taq酶用量、引物量)、電泳檢測方法的系統優(yōu)化，建立了柑桔SRAP-PCR和ISSR-PCR體系；以此進行大規(guī)模引物篩選，從而建立了柑桔SRAP和ISSR分子標記技術體系。SRAP-PCR：25μL體系，模板DNA25ng，Tris-HCl10mmol/L，KCl50mmol/L，Mg2+1.2mmol/L，dNTP120μmol/L，Taq酶1.5U，引物0.
3、4μmol/L，反應程序為94℃預變性5min，35個循環(huán)(94℃30s，47℃1min，72℃1min)，72℃延伸10min；ISSR-PCR：25μL體系，模板DNA25ng，Tris-HCl10mmol/L，KCl50mmol/L，Mg2+1.6mmol/L，dNTP200μmol/L，Taq酶1U，引物0.8μmol/L。篩選出穩(wěn)定性好、多態(tài)性高的24對SRAP引物和13條ISSR引物。關鍵詞柑桔,SRAP,ISSR,建立,優(yōu)化EstablishmentandOptimizationof
4、SRAPandISSRMarkerSysteminCitrusWuXin1,2,3LeiTiangang2,3HeYongrui2,3LiuXiaofeng2,3XuLanzhen2,3PengAihong2,3ChenShanchun2,3*1CollegeofHorticulture&LandscapeDesigning,SouthwestUniversity,Chongqing,400716;2CitrusResearchInstitute,SouthwestUniversity,Chong
5、qing,400712;3NationalCitrusCultivarImprovementCenterofChina,Chongqing,400712*Correspondingauthor,scchen2004@vip.sina.comAbstractHerewehaveestablishedSRAP-PCRandISSR-PCRsysteminCitrusbyoptimizationofPCRreactionprogram,reactionsystem(templateDNA,reactio
6、nvolume,Mg2+,dNTP,TaqDNApolymeraseandprimer)andelectrophoresisdetectionexperiments.Basedonthesereactionsystems,amassofprimershavebeenscreened.Intheend,wegotoptimumSRAPandISSRmarkersystemsinCitrus.SRAP-PCRsystem:templateDNA25ng,Tris-HCl10mmol/L,KCl50mm
7、ol/L,Mg2+1.2mmol/L,dNTP120μmol/L,TaqDNApolymerase1.5U,primer0.4μmol/Lin25μLsystem,reactionprogram:initialdenaturationstepfor5minat94℃,followedby35cyclesat94℃for30s,47℃for1minand72℃for1min,followedbyafinalextensionstepat72℃for10min;ISSR-PCRsystem:templ
8、ateDNA25ng,Tris-HCl10mmol/L,KCl50mmol/L,Mg2+2.0mmol/L,dNTP200μmol/L,TaqDNApolymerase1U,primer0.8μmol/Lin25μLsystem.24pairsofSRAPprimersand13ISSRprimers,withhighstabilityandpolymorphism,hasbeenobtained.KeywordsCitrus,SRAP,ISSR,Establishment,Opt
