高脂誘導(dǎo)的胰島素抵抗大鼠肝臟mfn2表達(dá)與線粒體功能

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1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文高脂誘導(dǎo)的胰島素抵抗大鼠肝臟Mfn2表達(dá)與線粒體功能姓名：朱春景申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：宋光耀201203中文摘要高脂誘導(dǎo)的胰島素抵抗大鼠肝臟Mfn2表達(dá)與線粒體功能摘要一目的：研究高脂飲食誘導(dǎo)的胰島素抵抗大鼠肝臟中線粒體融合蛋白2(Mitofusin2：Mfn2)的表達(dá)及線粒體結(jié)構(gòu)和功能的變化情況；以明確Mfn2的表達(dá)與線粒體結(jié)構(gòu)、功能的關(guān)系，為研究胰島素抵抗的分子機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。．一．～?方法：本研究以4周齡SD大鼠為研究對象，‘適應(yīng)性喂養(yǎng)l周后隨機(jī)分為正常飲食組20只和高脂飲食組20只。1通過高脂飼料喂養(yǎng)SD大鼠構(gòu)建

2、胰島素抵抗的動物模型：正常飲食．組給予普通飼料(熱量組成：脂肪10．3％，蛋白質(zhì)24．2％，碳水化合物65．5％，總熱量為348kcal／100g)；高脂飲食組給予高脂飼料(熱量組成：脂肪59．8％，碳水化合物20．1％，蛋白質(zhì)20．1％，總熱量為501kcal／100g)曩+’．．一，，2在喂養(yǎng)4周時，每組隨機(jī)選取lO只大鼠行高胰島素正葡萄糖鉗夾實(shí)驗(yàn)檢測胰島素抵抗程度，鉗夾實(shí)驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行下述指標(biāo)檢測d‘2．1常規(guī)指標(biāo)檢測：采用葡萄糖氧化酶法測尾尖空腹血糖；采用酶聯(lián)免疫法測血清中空腹胰島素的水平：采用生化法測血清中膽固醇和甘油三酯的含量。2．2線粒體結(jié)構(gòu)功能檢測：

3、采用HE染色觀察肝臟細(xì)胞形態(tài)變化；采用透射電鏡觀察肝臟線粒體結(jié)構(gòu)變化；采用比色法測定肝臟組織線粒體懸液中琥珀酸脫氫酶和細(xì)胞色素C氧化酶的活性。r．一2．3Mfn2檢測：采用Real-timeRT-PCR檢測肝臟中線粒體融合蛋白2的mRNA表達(dá)情況；采用Westernblot檢測肝臟中線粒體融合蛋白2的蛋白含量。3繼續(xù)喂養(yǎng)剩余的大鼠到8周時，再次行高胰島素正葡萄糖鉗夾實(shí)驗(yàn)檢測胰島素抵抗程度，鉗夾實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死剩余的大鼠，重復(fù)上述指標(biāo)檢測。結(jié)果：一：’■～中文摘要‘。二’一一1喂養(yǎng)4周后高胰島素正葡萄糖鉗夾實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示；高脂飲食組葡萄·糖輸注率24．254-0．87m

4、g／(kg．min)低于正常飲食組25．20圭0．61mg／(kg．min)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0．05)；高脂飲食組空腹胰島素的含量28．084-0．65mU／L高于正常飲食組26．30-士0．85mU／L,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(尸一

5、；兩組體重差異仍無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(尸>o．05)；高脂飲食組空腹血糖的水平5．09士o．15mmo兒。高于正常飲食組：4．85士0．09mmol／L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

6、L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(尸<0．01)。．～?～?一4?！弧觥觥?。·。一3肝臟HE染色結(jié)果顯示：4周時正常飲食組中肝細(xì)胞形態(tài)正常，體積正常；高脂飲食組肝臟細(xì)胞部分出現(xiàn)脂肪變性，細(xì)胞體積有所增大，胞‘質(zhì)中可見部分空泡變性。8周時正常飲食組中肝細(xì)胞形態(tài)及體積均正常，未見炎性細(xì)胞浸潤；高脂飲食組肝臟細(xì)胞出現(xiàn)彌漫性脂肪變性，以中央靜一脈區(qū)最為明顯，細(xì)胞體積增大，胞質(zhì)中可見空泡變性，中央靜脈區(qū)可見炎性細(xì)胞浸潤?！ぁぁ??一一’4肝臟透射電鏡結(jié)果顯示：4周時正常飲食組肝細(xì)胞中線粒體內(nèi)外膜清晰可見，線粒體嵴形態(tài)正常，排列規(guī)則，胞質(zhì)中未見脂滴；高脂飲食組肝細(xì)胞胞核周圍可見散在

7、脂滴，線粒體內(nèi)外膜清晰可見，線粒體嵴出現(xiàn)部分融合。8周時正常飲食組肝細(xì)胞中線粒體形態(tài)清晰可見，線粒體內(nèi)外膜清晰可見，線粒體嵴形態(tài)正常；～高脂飲食組肝細(xì)胞胞核周圍可見體積較大’的脂滴，線粒體內(nèi)外膜出現(xiàn)部分或全部融合，線粒體嵴全部消失，呈現(xiàn)空泡化表現(xiàn)?！?．+一?‘一’．-。二：0．，‘‘5反映線粒體功能的兩個關(guān)鍵酶活性測定結(jié)果：耷局時高脂飲食組琥4珀酸脫氫酶的活性9．2034-1．549U／rag．prot，低于正常飲食組琥珀酸脫氫酶一中文摘要．一的活性11．7954-1．829U／mg．prot，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

8、．368土