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《高脂誘導(dǎo)胰島素抵抗大鼠的肝臟基因表達(dá)譜、粗提線粒體蛋白質(zhì)組、mirnas的初步研究-臨》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、論文題目:高脂誘導(dǎo)胰島素抵抗大鼠的肝臟基因表達(dá)譜、粗提線粒體蛋白質(zhì)組、MiRNAs的初步研究答辯委員會(huì)主席：陳霖答辯委員會(huì)成員：呂建新陳秀樞論文答辯日期:2011年5月31日溫州矢學(xué)院碩士學(xué)位論文Y1946483目錄高脂誘導(dǎo)胰島素抵抗大鼠的肝臟基因表達(dá)譜.粗提線粒體蛋白質(zhì)組、MiRNAs的初步研究44＞壬卷至4第一部分高脂誘導(dǎo)胰島素抵抗大亂模型的建立和相關(guān)檢測(cè)11第二部分高脂誘導(dǎo)胰島素抵抗大鼠肝臟基因表達(dá)譜初步分析第一章材料和方法25第二章結(jié)果第三部分高脂誘導(dǎo)胰島素抵抗大鼠肝臟粗提線粒體餐白質(zhì)組初步分析33第一章材料和方
2、法第二章結(jié)呆37第四部分高脂誘導(dǎo)胰島素抵抗大鼠肝臟MiRNAs差異表達(dá)分析43第一章材料和方法??第二章結(jié)果46分析與討論…50溫州IK學(xué)院碩士學(xué)付論文附錄綜述63■學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明73高脂誘導(dǎo)胰島素抵抗大鼠的肝臟基因表達(dá)譜.粗提線粒體蛋白質(zhì)組、MiRNAs的初步研究（省自然基金資助項(xiàng)目No:Y2090753）中文摘要目的1.建立高脂誘導(dǎo)胰島素抵抗的大鼠模型。2.初步篩選出肝臟可能參與胰島素抵抗發(fā)生的mRNA、蛋白（粗提線粒體）、miRNAs,為后續(xù)工作準(zhǔn)備。3.進(jìn)一步了解胰島素抵抗的形成機(jī)制，并為診斷、治療和改善胰島
3、素抵抗提供的潛在靶點(diǎn)。方法1?實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：13只雄性SD大鼠（普食組6只，髙脂組7只），4?5w,130g左右；高脂配方：基礎(chǔ)飼料80%,豬油18%,膽固醇2%。監(jiān)測(cè)體重，根據(jù)H0ME4RKGTTs、ITTs判斷系統(tǒng)胰島素抵抗形成后處理大鼠，觀察肝臟外觀、稱(chēng)其濕重，進(jìn)行血清基礎(chǔ)生化、游離脂肪酸譜檢測(cè)，肝臟透射電鏡、線粒體拷貝數(shù)、能量指標(biāo)、ROS檢測(cè)。2.肝臟基因表達(dá)譜：肝臟總RNA提取后行mRNA表達(dá)譜芯片檢測(cè)（IlluminaRatRef^12Beadchip）,結(jié)果行KEGG分析。3?肝臟粗提線粒體蛋白質(zhì)組：粗提肝臟線
4、粒體蛋白，2?D分析找差異蛋白，挖取做MALDi-TOF質(zhì)譜分析，然后Mascot軟件分析，數(shù)據(jù)再KOG分類(lèi)。4?肝臟miRNAs：肝臟總RNA提取后行miRNA的IlluminaSolexa測(cè)序、結(jié)果使用Mirtools軟件分析，對(duì)差異miRNAsfflreal-timePCR進(jìn)行驗(yàn)證，后用miRDB軟件進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)。?5.對(duì)差異mRNA、蛋白質(zhì)、miRNAs進(jìn)行綜合分析。結(jié)果1?第12周時(shí)，HOME-IRkGTTs.ITTs結(jié)果提示系統(tǒng)胰島素抵抗形成，此時(shí)表現(xiàn)為肥胖，脂肪肝，肝濕重增加，血脂紊亂，血清游離脂肪酸譜異
5、常，電鏡顯示肝?細(xì)胞內(nèi)大量脂滴堆積.線粒體腫脹、胞核被擠壓或固縮、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增生，線粒體拷貝數(shù)明顯降低，ROS明顯升高，能量指標(biāo)無(wú)明顯變化。i2?對(duì)提取合格的肝臟總RNA用含24000個(gè)探針的大鼠全基因組芯片檢測(cè)，經(jīng)校正和差異分析后獲得1756個(gè)差異基因.進(jìn)一步采用FDR后還有502個(gè)，顯著上調(diào)的290個(gè)，顯著下調(diào)的212個(gè)。再經(jīng)KEGG通路分析，發(fā)現(xiàn)物質(zhì)代謝、炎信癥免疫通路、氧化/抗氧化系統(tǒng)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng).信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、細(xì)胞骨架等的變化。3?對(duì)粗提的肝臟線粒體蛋白行2?D分析，分離到的蛋白點(diǎn)數(shù)普食組1012±45.53,高脂組1
6、029.67±42.72個(gè)，差異點(diǎn)128個(gè)；取其中105個(gè)做MALDI-TOF質(zhì)譜分5析，數(shù)據(jù)經(jīng)搜庫(kù)及分析整理，最終確定24個(gè)差異蛋白，即和普食組相比，高脂
7、■組中顯著上調(diào)的9個(gè)蛋白，顯著下調(diào)的15個(gè)蛋白；KOG分類(lèi)發(fā)現(xiàn)它們主要參與生物代謝、細(xì)胞生命過(guò)程及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等。4.對(duì)提取合格的肝臟總RNA用Solexa法對(duì)其miRNAs進(jìn)行測(cè)序，結(jié)果ffMirtools數(shù)據(jù)分析，獲得的已知miRNAs中普食組236個(gè)，高脂組239個(gè)，未知miRNAs中普食組22個(gè)，高脂組141個(gè)，差異miRNAs10個(gè)。對(duì)差異miRNAs進(jìn)行相對(duì)
8、定量PCR，獲1?5倍以上差異的miRNAs8個(gè)，用miRDB軟件進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)一些炎癥、糖利用、細(xì)胞分化等相關(guān)的基因。結(jié)論高脂誘導(dǎo)的胰島素抵抗大鼠模型可表現(xiàn)為肥胖.肝臟脂質(zhì)沉積、血脂代謝異常、線粒體形態(tài)和數(shù)量受損、ROS增多、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增生。檢測(cè)獲得的差異mRNA、蛋白質(zhì)、miRNAs,綜合分析發(fā)現(xiàn)這種脂毒性可致物質(zhì)代謝紊亂.炎癥、免疫、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、氧化應(yīng)激活躍，抗氧化系統(tǒng).胰島素通路則受損。而發(fā)生變化的各分子或各通路在該病理過(guò)程中具體功能需進(jìn)一步研究驗(yàn)證。關(guān)鍵詞高脂；胰島素抵抗；基因表達(dá)譜；線粒體蛋白質(zhì)組；MiRNA
9、sStudyonLivermRNAExpression,PreliminarilyExtractingMitochondrialProteomicsandDifferentialMiRNAsofRatswithInsulinResistanceInducedbyHFDSupportedbyProvinchlScien
