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《tim-1信號通路在小鼠實驗性結(jié)腸炎中的作用》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、南昌大學碩士學位論文Tim--1信號通路在小鼠實驗性結(jié)腸炎中的作用姓名：王萍申請學位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學指導教師：謝勇201206摘要背景與目的：炎癥性腸病(IBD)的發(fā)病機制和病因非常復雜，我們的前期研究和文獻報道發(fā)現(xiàn)TLR信號通路和Th免疫反應(yīng)的異常在其中起著十分重要的作用，并且這些異常在不同類型的IBD(CD和UC)中有所不同，但是其發(fā)生機制尚不明確。為何不同類型的IBD會出現(xiàn)不同的Th優(yōu)勢反應(yīng)，它們的調(diào)控機制不清楚。Tim．1信號通路是最新發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)Th免疫反應(yīng)的核心環(huán)節(jié)，并且與TLR信號
2、通路有著密切的關(guān)系。然而Tim．1信號通路在IBD發(fā)生發(fā)展中的作用，及它與IBD的Th免疫反應(yīng)和TLR信號通路變化的關(guān)系國內(nèi)外尚未見報道。為此，本文研究不同類型的小鼠實驗性結(jié)腸炎(分別類似人類的UC和CD的動物模型)Tim．1信號通路的變化及其與調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)和TLR信號通路的關(guān)系，并以此為干預(yù)靶點，分別觀察Tim．1信號通路對不同類型小鼠實驗性結(jié)腸炎的Treg細胞和TLR信號通路的影響，及其與疾病的的關(guān)系，從這一新的角度來探討IBD的發(fā)病機制，為IBD的防治提供新的靶點和方向。方法：1．
3、實驗分組(1)Tim．1抗體未處理小鼠組；(2)Tim．1抗體預(yù)處理小鼠組；每組內(nèi)再分為：①正常對照組；②DSS模型組；③TNBs模型組。2．小鼠實驗性結(jié)腸炎模型的建立(1)DSS誘導小鼠實驗性結(jié)腸炎模型的建立：BALB／c小鼠自由飲用5％DSS溶液7天，建立小鼠急性結(jié)腸炎模型。(2)TNBS誘導小鼠實驗性結(jié)腸炎模型的建立：BALB／C小鼠禁食、不禁飲24小時后，乙醚麻醉，用3．5F導管從肛門插入腸道深約5．5em處，灌注TNBS／50％乙醇溶液roost(含2mgTNBS的50％乙醇溶液)，之后將
4、小鼠倒置60秒。從造模第一天開始，每日觀察并記錄各組小鼠體重、大便性狀，7天后處死小鼠。f3)小鼠Tim．1信號通路的干預(yù)：小鼠建模前12h，腹腔內(nèi)注射100lag抗-Fc抗體消除非特異性吸附后，再給予25099抗一Tim·lAb腹腔注射，對照小鼠給予同等劑量的lgG2a。摘要3．觀察以下各項指標：(1)各組小鼠每天的體重變化、結(jié)腸炎疾病活動指數(shù)(DAI積分)；f2)Nt艮觀察小鼠結(jié)腸大體形態(tài)改變，HE染色觀察小鼠結(jié)腸炎病理組織學損傷程度；(3)Westernblot法檢Nd,鼠結(jié)腸組織中Foxp3
5、、MyD88、SIGIRR、Tim．1蛋白的表達；(4)免疫組織化學染色檢測小鼠結(jié)腸組織中Foxp3、MyD88、SIGIRR、NF．1出p65蛋白的表達。結(jié)果：1．各組小鼠體重變化及DAI積分實驗第5、7天，各模型組小鼠體重下降百分比均顯著高于相應(yīng)的對照組(P<0．01)。在Tim．1抗體預(yù)處理組中，DSS組小鼠體重下降百分比顯著高于TNBS組(P<0．01)。小鼠體重變化在Tim．1抗體未處理組和預(yù)處理組之間有差異，僅實驗第7天DSS組問差異有統(tǒng)計學意義(P<0．05)，其余組問差異無統(tǒng)計學意義
6、(P>0．05)。在實驗第5、7天，無論是Tim．1抗體未處理組還是預(yù)處理組中，模型組小鼠DAI積分均顯著高于相應(yīng)對照組(P<0．01)。Tim．1抗體預(yù)處理的各組小鼠DAI積分均高于未處理組，但都無統(tǒng)計學意義(P>O．05)。2．小鼠腸黏膜大體形態(tài)和結(jié)腸組織病理變化(1)無論是Tim一1抗體未處理組還是預(yù)處理組，對照組小鼠結(jié)腸黏膜呈淡紅色、光滑完整，未見充血、水腫、糜爛、潰瘍，DSS組和TNBS組小鼠結(jié)腸黏．膜可見充血、水腫、糜爛。(2)無論是在Tim．1抗體未處理組還是預(yù)處理組，模型組小鼠的結(jié)腸
7、炎癥程度、病變深度、隱窩破壞均顯著高于對照組(P<0．01)oTim．1抗體預(yù)處理的各組小鼠病理組織學損傷程度均高于未處理組，但只有DSS組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0．05)。3．小鼠結(jié)腸組織中Foxp3的表達(1)免疫印跡檢測發(fā)現(xiàn)，在Tim．1抗體未處理組中，模型組Foxp3蛋白的表達低于對照組，但無統(tǒng)計學意義(P>0．05)。在Tim．1抗體預(yù)處理組中，對照組Foxp3蛋白的表達顯著高于兩個模型組(P<0．01)。Foxp3蛋白表達在Tim．1抗體未處理組和預(yù)處理組之間的差異無統(tǒng)計學意義(P>0
8、．05)。摘要(2)免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，無論是在Tim．1抗體未處理組還是預(yù)處理組中，對照組Foxp3陽性炎細胞數(shù)顯著高于模型組(P<0．01)。1h．1抗體預(yù)處理的各模型組Foxp3陽性細胞數(shù)均低于未處理小鼠，但只有DSS組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0．05)。4．小鼠結(jié)腸組織中SIGIRR的表達(1)免疫印跡檢測發(fā)現(xiàn)，在Tim．1抗體未處理組中，對照組SIGIRR蛋白表達高于模型組(P<0．01，0．05)，DSS組高于TNBS組(P<0．05)。在Tim一1抗體預(yù)處
