ssos演替用于pmi推斷的法醫(yī)學研究

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1、萬方數據中圖分類號＆墨窆UDC610碩士學位論文學校代碼!Q533密級公玨SSOs演替用于PMI推斷的法醫(yī)學研究SSOssuccessionasapotentialindicatorforPMIestimation作者姓名：學科專業(yè)：研究方向：學院(系、所)：指導教師：謝丹法醫(yī)學法醫(yī)昆蟲學基礎醫(yī)學院蔡繼峰教授論文答辯日期zQ盟烏通盔臼答辯委員會主瘟中南大學二零一四年五月萬方數據原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中南大學或

2、其他單位的學位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻均已在論文中作了明確的說明。作者簽名：』迫出日期：—碰年』月盟日學位論文版權使用授權書本人了解中南大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即：學校有權保留學位論文并根據國家或湖南省有關部門規(guī)定送交學位論文，允許學位論文被查閱和借閱；學校可以公布學位論文的全部或部分內容，可以采用復印、縮印或其它手段保存學位論文。同時授權中國科學技術信息研究所將本學位論文收錄到《中國學位論文全文數據庫》，并通過網絡向社會公眾提供信息服務。作者簽名：牡導師簽名趟期：礎一年j月幺日／7∥^口卜愾作者簽名：j杠導師簽名』龜曲期：礎一年j月

3、幺日萬方數據SSOs演替用于PMI推斷的法醫(yī)學研究摘要背景：死亡時間(postmorteminterval，PMI)推斷一直是法醫(yī)工作的研究重點和熱點，腐敗尸體的PMI推斷更是法醫(yī)學實踐中的難題。微生物在尸體腐敗過程中的作用越來越引起法醫(yī)學者的重視。尸體腐解的原因是昆蟲和微生物共同作用的結果。尤其在機體死亡至昆蟲接觸尸體之前的時間間隔里，尸體的腐敗分解更是由微生物主導完成的。微生物中能產生腐敗代謝產物的細菌通常稱為特定腐敗微生物(specificspoilageorganisms，SSOs)。已有研究表明腐敗過程也是SSOs相互作用和演替的過程，為研究尸體上SSOs的演替規(guī)律進

4、行PMI推斷的法醫(yī)學研究提供了理論和實踐基礎。目的：在隔離昆蟲和未隔離昆蟲兩種不同的環(huán)境下，調查大鼠尸體上SSOs的演替規(guī)律，對比大鼠尸體上口腔、眼周、陰道不同部位SSOs種類差異，分析不同PMI的SSOs種類及數量變化規(guī)律，尋找具有PMI推斷價值的優(yōu)勢SSOs，探索利用SSOs演替規(guī)律進行PMI推斷的程序和方法。并對人尸體SSOs演替規(guī)律進行PMI推斷的初步探索。方法：運用Miseq高通量測序技術，研究PMI=Oh，24h，216h時的大鼠尸體口腔SSOs，初步篩選可規(guī)律性演替的菌群?；谠摵Y選結果，通過細菌常規(guī)生化鑒定法及16SrDNA分子鑒定法雙向驗證，對比研究大鼠尸體不

5、同部位相關時間點SSOs種類變化規(guī)律；應用細菌分析儀進行菌種半定量計數，進一步驗證不同PMI有規(guī)律演替的菌群。并收集調查明確PMI的成人尸體上菌種的分布情況，探索利用SSOs演替規(guī)律對人尸體PMI推斷的新途徑。結果：Miseq高通量測序結果在生物分類學種水平上共獲得81個種的SSOs，其中鏈球菌和巴斯德菌在口腔SSOs結構中占主要地位，分別在每個組中占25％以上的序列數。尸體腐化24h后，大部分SSOsII萬方數據呈現遞減和消失趨勢，而八疊球菌屬及葡萄球菌屬呈遞增的趨勢并成為優(yōu)勢菌，SSOs多樣性顯著降低。通過常規(guī)生化鑒定法對SSOs菌種初步定性與定量并通過16SrDNA分子鑒

6、定雙向驗證，獲取了隔離昆蟲和未隔離昆蟲兩種不同的環(huán)境下，大鼠尸體口腔、眼周和陰道三個不同部位，PMI=0h，24h，216h各個確定時間點上SSOs的詳細演替資料，共發(fā)現7個科(真菌，放線菌，假單胞菌，桿菌，腸桿菌，放線菌，葡萄球菌)，并細分為38個種。成人尸體上共發(fā)現了8個科30個種的SSOs，種類和數量均要低于健康成人，成人和大鼠尸體之間的SSOs分布規(guī)律有著很多的相似性。結論：本研究發(fā)現通過Miseq高通量測序，對比分析PMI=Oh的樣本M1，PMI=24h的樣本M2以及PMI=216h的樣本M3發(fā)現，大鼠尸體在24h內口腔SSOs多樣性顯著降低，少數優(yōu)勢菌群如肺炎鏈球菌

7、(Streptococcussp．)和侵肺巴斯德菌(Pasteurellapneumotropica)等凸顯。而在尸體晚期PMIM3階段出現的優(yōu)勢菌屬為八疊球菌屬(Sporosarcina)及葡萄球菌屬(Staphylococcus)。在尸體各部位SSOs演替過程中豬鏈球菌(StreptococcussuisI)：解乳糖奈瑟菌(Neisserialactamica)及糞腸球菌(Enterococcusfaecalis)演替規(guī)律凸顯。大腸桿菌(Escherichiacoli)和奇異變形桿菌(p