四株刺參益生菌的發(fā)酵工藝及實驗性養(yǎng)殖應(yīng)用效果分析

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1、中國海洋大學碩士學位論文四株刺參益生菌的發(fā)酵工藝及實驗性養(yǎng)殖應(yīng)用效果分析姓名：元福杰申請學位級別：碩士專業(yè)：水產(chǎn)養(yǎng)殖指導教師：潘魯青；王印庚201206四株刺參益生菌的發(fā)酵工藝及實驗性養(yǎng)殖應(yīng)用效果分析摘要本研究以4株分離自健康刺參腸道的益生菌Aj0807181A一15，A．j080719lA—12，Aj080719lA一16和Aj0807181A一25為對象，在實驗室條件下進行了簡易發(fā)酵配方優(yōu)化和發(fā)酵條件優(yōu)化實驗，確定了4株有益菌的最佳發(fā)酵配方和發(fā)酵條件參數(shù)；并通過室內(nèi)飼養(yǎng)刺參，評估了施用4株益生菌對刺參生長、

2、免疫力和對刺參腸道菌群及養(yǎng)殖水環(huán)境微生態(tài)結(jié)構(gòu)的影響；另外，針對4株益生菌對常見水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的安全性進行了檢測和觀察。在上述研究基礎(chǔ)上開發(fā)出了兩種刺參有益菌制劑，包括一種單體制劑和一種復合制劑。本論文主要研究成果如下：1．首先通過單因素實驗確定了4株益生菌的最佳發(fā)酵條件；同時經(jīng)過單因素實驗和正交實驗確定最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方，在此基礎(chǔ)上進行了10L發(fā)酵罐中試發(fā)酵試驗，建立了一套實驗室條件下益生菌的發(fā)酵工藝。以芽孢形成時間確定了最佳發(fā)酵時間32h，最佳發(fā)酵條件，溫度28℃，初始pH7．5，接種量5％，轉(zhuǎn)速170rpm；

3、最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基配方為葡萄糖2．59／L、豆粕粉15．／mL、氯化鈉109／L。研究發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌對其他3株菌有強烈的生長抑制作用，故采取單株發(fā)酵工藝。2．通過施用益生菌開展刺參養(yǎng)殖應(yīng)用實驗，評價了使用有益菌制劑對刺參免疫酶活力、蛋白酶活力、生長、腸道菌群定植以及對養(yǎng)殖水環(huán)境微生態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，并通過燦爛弧菌(附打jD印』鯽出出s)攻毒試驗，探究了使用益生菌對刺參抗病力的影響。實驗表明：單一菌劑和復合菌劑都可以顯著提高刺參腸道酸性磷酸酶(AKP)、堿性磷酸酶(ACP)和超氧化物歧化酶(SOD)活力(P

4、，對溶菌酶(LSZ)活力影響不顯著；另外，顯著提高腸道蛋白酶活力，復合菌劑最高可提高蛋白酶活力3倍；可明顯提高刺參生長速度，復合菌劑最高特定生長率幾乎可以達到對照組的2倍；一定濃度益生菌的加入可以顯著影響刺參腸道和養(yǎng)殖水體的微生態(tài)結(jié)構(gòu)，總異養(yǎng)菌數(shù)顯著增加，而弧菌數(shù)量及比列明顯降低；攻毒試驗結(jié)果表明，濃度為106cfu／m1的復合益生菌對刺參抗燦爛弧菌的相對免疫保護率可以達到75％。3．觀察分析了4株益生菌對常見海水養(yǎng)殖動物的安全性，主要包括刺參、鮑魚、大菱IV鲆、花鱸、許氏平鼬和中國對蝦。采取單菌株和復合菌劑浸

5、泡養(yǎng)殖動物15d，結(jié)果表明，106cfu／ml濃度的菌劑對上述動物是安全的，對生長、攝食和存活均無影響。本文研究確定了實驗室條件下益生菌的發(fā)酵工藝，將為進行刺參益生菌的規(guī)模化生產(chǎn)發(fā)酵提供理論依據(jù)；證實了使用有益菌制劑對刺參生長、免疫酶活力、抗病力、蛋白酶活力、腸道菌群定植以及對養(yǎng)殖水環(huán)境微生態(tài)結(jié)構(gòu)的正面影響；確定了有益菌的安全使用濃度，這將為有效、安全使用微生態(tài)制劑提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和技術(shù)支撐，對推動微生態(tài)制劑的廣泛應(yīng)用和建立海參矬康養(yǎng)殖工藝具有重要的現(xiàn)實意義。關(guān)鍵詞：刺參；益生菌；發(fā)酵；免疫力；微生態(tài)結(jié)構(gòu)；安全性V

6、Thefermentationtechniqueoffourstrainsofprobioticsandit’seffectin月J口Ds亡／c廳a：p“s-／ra：pD，7／c“scuItureAbstractThisstudyfocusedonfourstrainsofprobioticsAj080718lA．15，Aj0807191A．12，Aj0807191A—16andAj080718lA一25，whichwel．eis01atedf而mtheintestineofhealthyseacucumber

7、卻Dsfjc，z9p淞卻onic粥．BaSedontheexp耐mentalstudy，thebestfbmlentationformulaandthefbrnlentationconditionsweredeterminedfortllefourstrainsofbeneficialbact耐a．AndtheapplicationeffectoftheprobiotiGsinseacucumbercultllrewaSaccomplishedtllroughaseriesofindoorexperiments

8、，mainlyincludir瑪thegrowth，immunityandmicroec0109icalchangesofseacucumber’sintestinea11dcultureenviroIllIlent．Thenthesafetyoftheprobioticswas鋤alyzedtocommonaquaticaIlimals．Onthebasisofrcsearchwor