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《（果樹學(xué)專業(yè)論文）梨果實(shí)acc氧化酶基因克隆的研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、摘要梨(Pear)屬薔薇科(Rosaceae)梨亞科(Pomaceae)梨屬(PyrusL．)植物，是我國重要的經(jīng)濟(jì)樹種之一，在我國有著悠久的栽培歷史。為解決困擾梨生產(chǎn)已久的果實(shí)儲藏、保鮮問題，本研究以乙烯是影響梨果實(shí)采后衰老、腐爛的主要因素為依據(jù)，從影響梨果實(shí)內(nèi)源乙烯合成的ACC氧化酶入手，對ACC氧化酶的基因進(jìn)行序列分析，以期為日后從遺傳基因上改變梨果實(shí)采后特性奠定基礎(chǔ)，取得了以下成果：1．建立了適合于梨果實(shí)總RNA提取的改良CTAB法。在比較熱硼酸法、異硫氰酸胍法、CTAB—LiCl法和改良CTAB法提取總RNA效果的基礎(chǔ)上，針對梨果肉組織中富含多酚、多糖的特
2、點(diǎn)，在傳統(tǒng)CTAB法的基礎(chǔ)上增加了去除多酚和多糖的步驟，取得了良好的試驗(yàn)結(jié)果，獲得了高質(zhì)量的梨果實(shí)總RNA。2．獲得三個(gè)梨品種ACC氧化酶基因eDNA片斷。以雪花梨、黃金梨、茄梨等3種果實(shí)為試材。提取并純化果實(shí)總RNA；經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成cDNA；根據(jù)ACC氧化酶的氨基酸保守序列翻譯成的密碼子核苷酸序列，設(shè)計(jì)合成一對特異引物；經(jīng)PCR擴(kuò)增、克隆分別得到三種梨果實(shí)的三條基因片斷。3．對獲得的基因片斷進(jìn)行亞克隆，經(jīng)測序獲得三個(gè)梨品種的ACC氧化酶基因序列；通序列比較得知研究獲得的三個(gè)基因片斷與已知其它梨品種ACC氧化酶基因的同源性均在9896以上，證實(shí)本研究得到的基因片斷為A
3、CC氧化酶基因的一部分。關(guān)鍵詞：梨；RNA；ACC氧化酶基因；cDNA；克隆TheStudyontheACCoxidasegenesCloneofPearfruitAuthor：DongZhenMajor：Pomologs"Supervisor．ZlumgYu-xingShenLian-yingAbstractgenusPyr吣，amemberofPomoideaeofRosaceae，isonekindofimportanteconomicfruittreeinChina,whichhasalongtimehistorytobecultivated．Thereis
4、adifficultyprobleminpearmanufacture，whichishowtostovethefruitfor’muchlonger．Ithadbeenprovedthattheethyleneplayamajormaturativeroleinfruitripeningbymo陀andmoreinvestigations．BasedonthestudiesofACCoxidasewhichisthekeyerlzymeinethylenebiosynthesizing,thisresearchistoclonetheACCoxidasegenes
5、ofpearfruitsandanalyzethegenestructures．nisworkwilldogreathelptomadeasolidfoundationforwhichtheresearchofbuildinganti·senseexpressionV朗巾orofACCoxidasegenesingenusPyn塔．Mainresultsofthisresearcha糟asfoliows：1．It’dbeenbuiltamethod,whichwassuittotheextractionofthetotalRNAofWhangkeumhae(肋rus
6、pyr的婦Nakai．)，Xuehua(砂rusbretschneideriRehd．)andClapp’SFavorite(毋ruscommunisLinn．)，thatWasimprovedC1=柚method．OnthebasisofmakillgcomparisonastotheeffectofextractingtotalRNAbyfourmethods，thatwere1．Hotboratemethod,2．Guanidineisooisothiocyanatemethod,3．C1：AB．LiClmethod,4．ImprovedCTABmetlled
7、,duetohiglllevelsofpolyphenoicontentandpolysaccharidesingenusPyrusfruittissues，thespecialstageofgettingridofpolyphenolcontentandpolysaccharidesWasaddedSOastoimprovetheconventionalCTABmethodinisolatingRNA．neresultsshowedthattheimprovedCTABmethodWasbetterthanothers．2．ObtainedthecDNAfra
